Creación de murino Experimental aneurismas de aorta abdominal con elastasa

Resumen

Este video muestra cómo inducir a los aneurismas de aorta abdominal (AAA) en ratones a través de la infusión intraluminal transitoria de la elastasa pancreática porcina en el segmento infrarrenal de la aorta abdominal. El modelo tiene la capacidad de agregar visión completa de la biopatología de la AAA, debido a la aparición de numerosos transgénicos y ratones knock-out de genes.

Resumen

Infusión intraluminal transitoria de la elastasa pancreática porcina en el segmento infrarrenal de la aorta abdominal es el modelo animal más utilizado del aneurisma de aorta abdominal (AAA) desde que fue descrita por primera vez en ratas por Anidjar y sus colegas. ¹ El fundamento de su desarrollo se basó sobre la naturaleza de la elastina interrumpido observado en AAA. Este modelo de rata ha sido modificado para producir AAA en la región de la aorta infrarrenal de los ratones. ² El modelo tiene la capacidad de agregar visión completa de la biopatología de la AAA, debido a la aparición de numerosos transgénicos y ratones knock-out de genes. Por otra parte, es una plataforma viable para probar agentes terapéuticos potenciales para la AAA. En este video, que demuestre el procedimiento de infusión elastasa AAA utilizada en nuestro laboratorio.

Los ratones son anestesiados utilizando isoflurano al 2,5%, y una laparotomía se realiza en condiciones estériles. El aortais abdominal aislado con la ayuda de un microscopio estereoscópico de funcionamiento (Leica). Después de colocar las ligaduras temporales alrededor de la aorta proximal y distal, una aortotomía se crea en la bifurcación con la punta de una aguja de calibre 30. Un segmento de calor en forma de cono de la tubería de polietileno PE-10 se introduce a través de la aortotomía y seguro. La luz de la aorta es posteriormente perfundidos durante 5-15 minutos a 100 mm Hg con el tipo de solución salina con que la elastasa pancreática porcina (4,5 U / ml, Sigma Chemical Co.). Después de retirar el catéter de perfusión, el aortotomía ha sido reparada sin la constricción de la luz.

Protocolo

1. Los ratones son anestesiados con isoflurano inhalado 2,0 3,0 ml / l.
2. El abdomen se rasura y limpia con alcohol y betadine.
3. El ratón es colocado en posición supina en el campo operatorio.
4. Guantes estériles son usados ​​por el cirujano, y los instrumentos utilizados han sido esterilizados con agua caliente esterilizador de cuentas.
5. Una larga incisión en el abdomen línea media se hace. Contenido abdominal se retraen fuera del abdomen con una gasa estéril para exponer la aorta abdominal.
6. La aorta abdominal es aislado del nivel de la vena renal izquierda hasta la bifurcación.
7. Las ramas de la aorta abdominal se exponen y se liga con 10-0. Todas las ramas de la aorta en 1,0 cm de la bifurcación se ligan.
8. Temporal 6,0 ligaduras de seda se colocan alrededor de las porciones proximales y distales de la aorta
9. Un aortotomía se crea en la bifurcación con una aguja de calibre 30.
10. El calor en forma de cono tubo de polietileno (PE-10) se introduce a través de la aortotomía y asegurado con un empate.
11. Usando una bolsa de solución salina colgado a la altura de 136 cm para calibrar 100 mmHg, la aorta se llena con la solución salina que contenía 4,5 U / ml Tipo I elastasa pancreática porcina. La aorta se dilata normalmente a 150-170% de su diámetro original durante la perfusión de la elastasa de 05.15 minutos.
12. El catéter se retira la perfusión y la aortotomía cierra con una sutura 10-0 para evitar la constricción.
13. Después de la aortotomía está cerrada, la ligadura distal se retira.
14. Si hay poco o ningún sangrado de la aortotomía reparado, la ligadura proximal se elimina. La aorta ampliado se llena de sangre inmediatamente.
15. Los intestinos se introducen en el abdomen, y la herida se cierra en dos capas con 6-0 nylon / polipropileno de sutura.
16. 0,25% Bupivicaime gotas (aprox una gota por cada centímetro del tamaño de la incisión) se coloca sobre la herida y una dosis de Caprofen (5mg/kg) se administra por vía subcutánea.
17. El ratón es colocado en un sitio caliente y se recupera en 15 minutos.

Figura 1. Resultados Representante de la elastasa inducida AAA.

Discusión

Estudios anteriores han observado importantes de lote a lote de variación en el desarrollo de diferentes preparaciones de AAA elastasa comercial ^3. Por lo tanto, es fundamental para controlar los lotes de producción, así como tener grupos de control adecuados a fin de documentar la capacidad de la preparación para inducir la AAA.

Curiosamente, la susceptibilidad al desarrollo de la AAA en este modelo depende de la cepa de ratón utilizada ^3. El ratón utilizado en el víde...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Elastasa pancreática porcina tipo I	Reactivo	Sigma-Aldrich	E1250
tubo de polietileno (PE-10)		BD Biosciences	427400
CHANGE-A-TIP		Bovie Medical Corporation	18010-00 (FST)	cuchillo electrocauterizador
LEICA MZ6		Leica Microsystems		estereomicroscopio
LEICA DFC290HD		Leica Microsystems		cámara USB
Image Pro Express ver. 6.0		Media Cybernetics Inc.		software