Este es un método para la generación de embriones de pez cebra gynogenetic diploide (embriones, cuya única contribución genética proviene de la madre) por el bloqueo de la segunda división meiótica inmediatamente después de la fertilización con luz ultravioleta inactiva los espermatozoides. EP embriones no son totalmente homocigotos debido a la recombinación en la primera división meiótica, sin embargo, son homocigotos en todos los lugares que no han sido separados de sus centrómero por recombinación.
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Artículo de método
Hacer pez cebra Gynogenetic diploides por presión inicial
En este artículo
Resumen
Resumen
Heterocigosidad en eucariotas diploides a menudo hace que los estudios genéticos engorroso. Métodos que producen descendencia viable diploides homocigóticos directamente de las mujeres heterocigotas permite F1 hembras mutadas que se proyectarán directamente de mutaciones deletéreas en una pantalla acelerado avance genético. Streisinger et al.
Protocolo
Resumen de la presión a principios
Nota: las recetas de muchos de los reactivos utilizados en este protocolo, como tricaína, peces de agua y solución salina Hanks están disponibles en línea en el capítulo 10 del Libro de pez cebra 3 ( http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html )
- Producir embriones por fecundación in vitro con esperma inactivado UV.
- Inmediatamente la transferencia de los óvulos fertilizados en un frasco de vidrio (con un tapón de presión de plástico) lleno hasta el borde con agua del huevo. Tapar el extremo abierto de la ampolla con una fi....
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Discusión
Es importante asegurarse de que los embriones producidos por este método son diploides cierto gynogenetic. Como controles, generar una nidada de huevos diploides normales (al mantener a un lado algunos de los espermatozoides sin UV-inactivación) y un grupo de embriones haploides (por un lado mantener una nidada de huevos fecundados con el esperma de UV, sin pasar por el procedimiento de EP). En un mensaje embriones haploides días de fertilización tienen un eje cuerpo corto, el cerebro y la morfología irregular somite. H.......
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Agradecimientos
Los métodos para la fertilización in vitro y diploides gynogenetic fueron desarrollados para el pez cebra por Charline Walker en el laboratorio de George Streisinger en la Universidad de Oregon en los años 1970 y 1980. El método descrito aquí no ha cambiado desde los protocolos de Charline que están disponibles en su totalidad en el Libro de pez cebra 3.
Los métodos para la fertilización in vitro y diploides gynogenetic fueron desarrollados para el pez cebra por Charline Walker en el laboratorio de George Streisinger en la Universidad de Oregon en los años 1970 y 1980. El método descrito aquí no ha cambiado desde los protocolos....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tricaina | Sigma-Aldrich | ||
| Placa de reloj | |||
| Prensa francesa | |||
| Cilindro de presión | |||
| Instant Ocean | |||
| Pipetas de Pasteur | Cortar el extremo estrecho, pulir con llama | ||
| Cruzador UV | |||
| Microcapilares |
Referencias
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Weste....
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Reimpresiones y permisos
