Artículo de método

Preparación y uso de las lesiones Phantom a la práctica de Bellas biopsia aspiración con aguja

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DOI:

10.3791/1404

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29 de septiembre de 2009

 ,  ,  , 
1Department of Pathology, University of Wisconsin - Milwaukee, 2BioInnovation LLC

En este artículo

Resumen

La práctica de biopsias por aspiración con aguja fina (PAAF) de los alumnos es relativamente difícil, debido a la falta de un fácil acceso, adecuados lesión. Preparación de un AV lesión fantasma para practicar el procedimiento de la PAAF y la competencia es relativamente fácil de dominar.

Resumen

En la actualidad, los trabajadores de salud, incluyendo residentes y becarios no tienen un modelo adecuado para practicar el fantasma de aspiración con aguja fina (PAAF) del procedimiento. En el pasado, se estandarizó un modelo que consiste en guantes de látex que contienen hígado de vacuno fresca para la práctica de la PAAF. Sin embargo, este modelo es difícil de organizar y preparar a corto plazo, con la adquisición de hígado de vacuno fresca es el aspecto más desafiante. Manejo de hígado con los problemas de contaminación relacionados con es también un atractivo importante de nuevo. Además, las fugas de material de los guantes después de una aguja de unos pocos pasos, con el consiguiente lío.

Hemos establecido un nuevo método simple de incorporar un pequeño trozo de salchicha o banana en una masilla de caucho de silicona disponibles en el mercado. Este modelo permite la retención de sellado al vacío y la aspiración de los contenidos de la muestra integrado, se asemeja a un procedimiento de PAAF real en lesiones de masa clínica.

El material aspirado en la base de la aguja puede ser procesado similar a los ejemplares adquiridos en un proceso real de la PAAF, facilitando la competencia adicional en la preparación de frotis y tinción.

Protocolo

  1. Preparación de la lesión fantasma (phantom preparar alrededor de 38 a 48 horas antes de la sesión actual de la práctica de PAAF de competencia (Figura 1) o utilizar la lista para su uso "AV fantasma" de la Fuente FNA, EE.UU.. La lesión fantasma (almacenado en refrigeración sin congelar) puede mantenerse preparados, incluso 3 o 4 días antes de la sesión de práctica.
  2. La práctica de PAAF de competencia: A pesar de que han demostrado el procedimiento a través de THFV Shidham (tejido Cosechadora con válvula funcional) (Fuente FNA, EE.UU.), cualquier otro sistema de FNA puede ser utilizado para la práctica (Figura 2).
  3. La difusión y el procesamiento de la aspiración en el portaobjetos de vidrio (Figura 3).

Material necesario

  1. Clara de caucho de silicona masilla, disponible en muchas tiendas de mejoras para la construcción de / home. Muchas marcas están disponibles, incluyendo GETM, DAP, Red Devil, White Lightning, y marcas locales de la cadena. Se utilizó goma de silicona transparente, Productos White Lightning, Cleveland, Ohio, EE.UU., http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html )
  2. Pistola para calafatear
  3. Un trozo de lámina de plástico (se utilizó Saran aferran Además Wrap, SC Johnson & Son Inc., Racine, WI, EE.UU. http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp
  4. Guantes de látex
  5. Plátano de gran diámetro o salchicha.
  6. Firme y plana placa base (aproximadamente 6 pulgadas x 6 pulgadas) hecho de cartón grueso, placa de acrílico, o de otro tipo.
  7. FNA realizar equipos
    • 25 agujas hipodérmicas calibre
    • Shidham de THFV (u otros componentes para la realización de PAAF)
    • portaobjetos de vidrio
    • kits de tinción

Paso a paso los detalles

A. Preparación de la lesión fantasma (phantom preparar 1 a 2 días antes de la práctica de PAAF de competencia (Figura 2) o utilizar listo para utilizar "AV fantasma" de la Fuente FNA, EE.UU..

  1. Corte un tamaño de 6 x 6 pulgadas de apoyar a bordo.
  2. Cortar un segmento de 2,5 pulgadas de largo de "núcleo lesión fantasma" (banana o salchicha).
  3. Expulsar a 0,5 pulgadas de espesor de capa de masilla en la placa base.
  4. Pulse el botón 'fantasma lesión fundamentales "a la ligera en esta capa de masilla.
  5. Añadir más masilla sobre el "núcleo lesión fantasma" de modo que está plenamente integrado en el montículo de masilla, sin burbujas de aire.
  6. Ajustar y dar forma a la masilla sobre "núcleo lesión fantasma 'con la mano enguantada.
  7. Tome un pedazo de 6 x 6 pulgadas de tamaño de papel de plástico y tapa el montículo masilla y ajustar la superficie del montículo en una configuración convexa lisa con las manos limpias, con guantes.
  8. Deje secar la masilla montículo de 6.8 horas más que el tiempo de curado mencionados en las instrucciones del producto, (por lo general por 24 horas), en un lugar cálido.
  9. Después de curar, la masilla debe ser firme, y la envoltura de plástico se pueden pelar fácilmente.
  10. La lesión FNA fantasma está listo para ser utilizado para practicar el procedimiento FNA después de aproximadamente 8 horas en todo el montículo de masilla ha curado por completo en el centro que contiene el "núcleo fantasmal lesión" (banana o salchicha).

B. La práctica de FNA competencia en AV lesión fantasma.

Cualquier enfoque en la obtención de alta calidad, adecuado aspirados FNA con los frotis de buena calidad citología directa debe abordar los siguientes puntos críticos-

  1. El calibre de la aguja implícita en el título del procedimiento, las agujas más finas (mayor número de calibre) mejor rendimiento aspirados con una dilución mínima de sangre. Para el balance crítico de los beneficios y limitaciones de 22 a 25 agujas de calibre son los preferidos para una óptima estabilidad mecánica de la aguja sin afectar la calidad aspirado FNA.
  2. El control de las secuencias apropiadas de aplicación de vacío y la liberación durante el procedimiento FNA-Esto es fundamental para avanzar en las células de la muestra con cada movimiento de la aguja, hacia la base de la aguja. Sin embargo, el material aspirado no se debe permitir que alcance en el área de la asamblea por aspiración con aguja con una jeringa. Si esto no se evita, el material puede ser difícil de recuperar para la toma de frotis (este material puede, sin embargo, utilizarse para la preparación del bloque de celdas o de los métodos de concentración como Cytospin, los métodos de filtro, o los últimos preparativos citología de base líquida).
  3. El desarrollo de habilidades apropiadas en el procesamiento de la muestra de aspirado, incluyendo la preparación de frotis directo y en el lugar adecuado con triaje de evaluación apropiados para las pruebas complementarias como la preparación de bloque de celdas para inmunocitoquímica electiva, citometría de flujo electiva para determinar el inmunofenotipo de las lesiones linfoproliferativas, la presentación de pases estériles para microbiología estudios, y su compañerorial de las pruebas moleculares (citogenética, etc.)

Realización de Ba procedimiento FNA (se muestra con THFV Shidham [1] (Fuente FNA, EE.UU.), sin embargo, cualquier otro sistema de FNA puede ser utilizado para la práctica). (Figura 3.4.5).

  1. Preparar a la asamblea FNA con la válvula cerrada.
  2. Localizar la lesión e inserte la aguja en la lesión.
  3. Abra la válvula para conectar el vacío, a través de la aguja a la punta, para aspirar representante de los componentes celulares de la lesión con cada uno de aquí para allá y los accidentes cerebrovasculares en la lesión.
  4. Mantener las áreas de vacío y diferentes muestras de la lesión mediante la inserción de la aguja en la lesión en diferentes direcciones.
  5. Cierre la válvula de desconectar el vacío en el lumen de la aguja.
  6. Igualar la presión con las condiciones ambientales (por ejemplo, desconectar la jeringa de la válvula de la aguja por un breve momento y volver a conectar. Si el dispositivo especial con medidas incorporadas, tales como "THFV" se utiliza, esta y otras medidas de Ba1 a través Aa6 son concertados automáticamente siguiendo los diferentes pasos en el sistema de válvulas) [1].
  7. Retire la aguja de la lesión con la válvula cerrada, con el fin de evitar la pérdida de la muestra por capilaridad en la lesión a menos que haya presión ligeramente negativa en el extremo centro.
  8. Desplazar el contenido atmosférico en el portaobjetos de vidrio para preparar frotis directo (ver más abajo) (figura 6).

Bb. Procesamiento de la muestra de aspirado con la clasificación apropiada
La difusión de la aspiración en el portaobjetos de vidrio y la preparación de los frotis directos de buena calidad (Figura 6) seguido de la tinción adecuada y triage (Figura 7,8).

  1. Una gota de aspirado de desprenderse de la lámina de vidrio se extiende por una variedad de enfoques, como se muestra en (Figura 6) [2]. El enfoque habitual es 'a'. Sin embargo, si la muestra es sangre diluida con algunos microfragmentos, el exceso de sangre se drena por la inclinación de la diapositiva, y el microfragmentos luego se reparten entre la diapositiva y diapositiva segunda copa similar a la 'a'. Si la aspiración es predominantemente una suspensión sin microfragmentos, como de las lesiones linfoproliferativas, se transmite similar a 'b' o 'c'.
  2. El frotis puede ser procesado y fijado en la variedad de formas para diferentes métodos de tinción durante la evaluación de idoneidad en el sitio. Sin embargo, lo mejor es secar al aire todos los frotis. Los frotis secados al aire se puede teñir con colorantes Romanowski (como Difff-Quik mancha, Wright) después de la fijación con metanol o Pap mancha después de la rehidratación con solución salina y después de la fijación (en el 95% de etanol o de preferencia en etanol al 95% con 5 ácido acético%) [3]. Eliminación de la interferencia debida a la sangre oscurece es un beneficio significativo [3].
  3. Dependiendo de los resultados durante la evaluación inicial citomorfológicos adecuación en el lugar, la clasificación adicional (como el bloque de celdas electiva, microscopía electrónica, cultivos microbiológicos, citometría de flujo, citogenética molecular pruebas, etc) se recomienda, como se indica.

Los resultados representativos:

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Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 1 .
Figura 1. Material necesario para la preparación de AV Phantom para la práctica de PAAF de competencia (* Usamos Saran Wrap de plástico que no se adhieren a la masilla al final, mientras se quita después de un curado completo de la masilla.)

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Figura 2. Preparación de AV lesión Phantom

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Figura 3. Pasos críticos en el procedimiento de FNA.

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Figura 4. EUS-FNA-Resumen de los pasos críticos * (ver Fig. 3)

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Figura 5. Dificultades relacionadas con los pasos críticos en el FNA procedure.

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Figura 6. Preparación de frotis directos de la muestra FNA entre dos diapositivas.

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Figura 7. Mojado frotis fijos y se seca al aire.

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Haga clic aquí para ver una versión ampliada de la figura 8.
Figura 8. Mojado frotis fijos y se seca al aire.

Discusión

Las biopsias con aguja fina de aspiración (PAAF) son ampliamente a cabo como una técnica económica, mínimamente invasivo seguro y rápido para el diagnóstico de los tejidos de diversos tumores y lesiones. En este procedimiento, una aguja de calibre 18 a 27 se inserta en la lesión, mueve adelante y atrás varias veces en diferentes áreas de la lesión bajo vacío controlado (de succión) de intensidad variable, que van desde un mínimo en la forma de que sólo una acción capilar a alrededor de 10 ml vacío en la jeringa para recuperar el material tejido de diagnóstico. Una aguja de calibre fino con mayor número es preferible recuperar el material de citología buena para preparar los frotis directos. Más amplia aguja de calibre 18G recupera más de muestra adecuada para bloquear celulares, citometría de flujo, microscopía electrónica, citogenética, microbiología, etc culturas Aunque el procedimiento es sencillo, el control de varios pasos con la correcta aplicación y liberación de vacío en las medidas adecuadas, de manera concertada es muy importante para obtener resultados óptimos.

Debido a la falta de disponibilidad de diseño especial de alto rendimiento agujas, agujas hipodérmicas convencionales o de sus modificaciones se utilizan para realizar este procedimiento. Sin embargo, las agujas hipodérmicas tienen muchas limitaciones que lleva a un bajo rendimiento de la muestra si se utiliza de manera convencional. El requisito de mordazas jeringa especial por lo general aumenta la complejidad del procedimiento. Por lo tanto, debido a la falta de disponible en el mercado de dispositivos adecuados aguja PAAF, este procedimiento de gran versatilidad sufre un problema frecuente de la recuperación de muestras inadecuadas. Recientemente, un dispositivo de aumentar el rendimiento con una reproducibilidad ha sido reportado [1].

Además, actualmente hay una falta de modelos adecuados para la práctica de competencia en la realización de PAAF de personal sanitario en formación como residentes y becarios. Teníamos un modelo estandarizado con un trozo de hígado vacuno fresco de peluche en guante de látex para la práctica de la PAAF de competencia. Sin embargo, este modelo es difícil de organizar en un corto plazo. Adquisición de hígado de vacuno fresca es generalmente la situación limitante. Además, el manejo de hígado puede introducir contaminación relacionada con factores como un atractivo importante de nuevo. La tendencia de los guantes de látex para después de una fuga de unos pocos pinchazos de agujas lleva a la confusión potencial durante la sesión de práctica.

Se presenta y describe un nuevo método sencillo, pero de la incorporación de un pequeño trozo de plátano (o salchicha) en una masilla de caucho de silicona disponibles en el mercado y otros materiales fáciles de conseguir. El fantasma de la PAAF conserva el sello de vacío lo que permite la aspiración de material de la muestra integrado, equivalente al procedimiento PAAF real de una lesión en el entorno clínico. En este video, que demuestre el procedimiento de toma de PAAF lesión fantasma y la práctica de procedimiento de la PAAF. También se muestra en el escrito del procesamiento de la muestra recuperada incluyendo la preparación de frotis y tinción [2,3].

Debido a que la masilla necesita tiempo para curar la lesión fantasma debe ser preparado con antelación de 24 a 48 horas antes de la sesión práctica. Comparables listo para su uso lesión fantasma se puede obtener de una fuente comercial (Fuente FNA, EE.UU.).

La lesión fantasma para la práctica de la PAAF competencia puede ser utilizado para la formación de los residentes y becarios antes del comienzo del desempeño de la PAAF en los pacientes en la clínica.

Referencias

  1. Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps. BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).
  2. Shidham, V. B., Epple, J. AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , 'Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids' First edition, Elsevier; W.B. Saunders Company. Chapter 15 207-235 (2007).
  3. Shidham, V., Kampalath, B., England, J. Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods. Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).

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