Detección rápida homogénea de Ensayos Biológicos Usando el Sistema de modulación magnética biosensores

Summary

Magnética modulación del sistema de biosensores se utiliza a la rápida, sensible y simplemente detectar ensayos biológicos, como las moléculas de ADN y las proteínas.

Abstract

Una modulación magnética sistema de biosensores (MMB) [1,2] con rapidez y de manera homogénea detectado dianas biológicas a bajas concentraciones, sin ningún tipo de lavado o etapa de separación. Cuando la IL-8 fue objetivo, un «sandwich' ensayo basado adjunta bolas magnéticas con IL-8 anticuerpo de captura a la estreptavidina acoplados a la proteína fluorescente a través de la IL-8 blanco y un IL-8 con biotina de anticuerpos. El perlas magnéticas se maniobran en el movimiento oscilatorio de la aplicación de un gradiente de campo magnético a través alternando dos polos electromagnéticos. Las proteínas fluorescentes, que se adjuntan a las perlas magnéticas se condensan en el área de detección y sus movimientos dentro y fuera de un rayo láser ortogonales produce una señal periódica fluorescente que se demodulada con detección síncrona. El sistema de modulación biosensores magnéticos se utilizó anteriormente para detectar las secuencias de codificación de la proteína no estructural del virus Ibaraki 3 (NS3) del ADN complementario (ADNc) [2]. Las técnicas que se muestran en este trabajo para la manipulación externa y la condensación de las partículas se pueden utilizar para otras aplicaciones, por ejemplo, entrega de medicamentos magnéticamente acoplados

Protocol

IL-8 del ensayo:

1. La mezcla de reacción fueron las siguientes cuatro componentes en 100 l de volumen final de tampón de ensayo en sus respectivas concentraciones. 10 l de bolas magnéticas con anticuerpos de captura en 100 bolas / l final de las concentraciones, 2 l de biotina IL-8 de anticuerpos en una concentración final nano-gram/μl, 1 l de proteínas fluorescentes de 20 estreptavidina concentración final nano-gram/μl, y 1 l de IL-8 blanco a 0,48 pico-gram/μl. Los componentes se añaden uno por uno para el tampón de ensayo y luego se agita durante 30 minutos.
2. Una reacción de control se prepara de la misma manera sin la IL-8 blanco.
3. Las r....

Discussion

En resumen, hemos demostrado que el sistema de MMB se puede utilizar para detectar la presencia de IL-8 blanco a bajas concentraciones (0,5 pico gramos es el límite de detección de los ensayos de precisión Bio-Plex citoquinas Pro [3,4]). La capacidad del sistema no se limita a la IL-8 y se puede utilizar para detectar otras proteínas. Las ventajas del sistema de MMB son la capacidad de detectar el objetivo rápidamente y sin ningún tipo de separación o paso de lavado. Por lo tanto, facilita el proceso de detección y perm.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bio-Plex Pro Juego de citocinas humanas IL-8	Bio-Rad	171-B5008M
Objetivo de IL-8 humano recombinante	Thermo Fisher Scientific, Inc.
Ratón monoclonal biotinilado, anticuerpo anti IL-8 humano G265-8	BD Biosciences	554718
Proteína fluorescente acoplada a estreptavidina	Bio-Rad	Estreptavidina PE