En este artículo se ilustra el método de inmersión floral de Agrobacterium tumefaciens La transformación mediada de Arabidopsis thaliana. Mediante la introducción de un ciclo celular regulados promotor-reportero, PTSO2:: β-glucuronidasa (GUS), En Arabidopsis, Que ilustra cómo se detecta la expresión de GUS en plantas transgénicas reportero.
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Artículo de método
Floral dip transformación de la Arabidopsis thaliana Para el Examen de PTSO2:: β-glucuronidasa Reporter Expresión Génica
En este artículo
Resumen
Resumen
La capacidad de introducir genes extraños en un organismo es la base de la biología moderna y la biotecnología. En el modelo de planta de flores
Protocolo
I. floral inmersión en la transformación de Arabidopsis thaliana
- Aproximadamente un mes antes de la transformación, sembrar las semillas de Arabidopsis en 4-8 botes (5 ollas pulgada cuadrada), con aproximadamente 10-15 plantas por maceta. Para las plantas con fertilidad normal, 4 macetas de plantas por construir el plásmido será suficiente. Si uno tiene que transformar Arabidopsis mutante con reducción de la fertilidad, aumentar el número de macetas en consecuencia.
- Las plantas se cultivan en condiciones estándar (16 horas luz y 8 h oscuridad a 22 ° C). Si las plantas se cultivan en día más corto o más baja temperatura,....
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Discusión
La eficiencia de transformación está determinada por muchos factores diferentes, que se analizan a continuación:
- La salud de las plantas y su edad son de vital importancia. Aproximadamente un mes las plantas produciendo numerosos botones florales inmaduros son ideales. Recorte de los brotes principales para fomentar la formación secundaria días 3-4 disparar antes de la transformación se incrementará la eficiencia de transformación. Las plantas más viejas dará lugar a transformantes, pero a un ritmo menor. <.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Damos las gracias a Chunxin Wang para la construcción de pTSO2:: GUS y las fotos en la Figura 1, Detlef Weigel para compartir el protocolo de GUS-a prueba de tontos, Sijacic Paja y Hollender Courtney por sus valiosos comentarios. Investigación en el laboratorio Z. L s es apoyado por los EE.UU. National Science Foundation (IOB0616096 y MCB0744752). ZL es parcialmente financiado por la Universidad de Maryland Estación Experimental Agrícola.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 6-benciladenina | Sigma-Aldrich | 852430 | |
| Silwet-77 | Crompton Corp. | Tóxico, usar guantes | |
| Medio basal de Murashige y Skoog (MS) | Sigma-Aldrich | M5519 | |
| Solución vitamínica de Gamborg’s 1000X | Sigma-Aldrich | G1019 | |
| X-Gluc (sal de ciclohexamina de 5-bromo-4-cloro-3-indolil β-D-glucurónido) | Biosynth International, Inc | B-7300 | Tóxico, sensible a la luz, mantener en la oscuridad |
| Cinta Micropore 3M | Fisher Scientific | 19027761 |
Referencias
- Clough, S. J. Floral dip: agrobacterium-mediated germ line transformation. Methods Mol Biol. 286, 91-91 (2005).
- Clough, S. J., Bent, A. F. Floral dip: a simplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana. Plant J....
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Reimpresiones y permisos
