Eliminación de pupario de insectos: un método para la investigación de pupas

En este artículo

Resumen

Fuente: Fukutomi, Y., et al. Métodos para la escenificación de los períodos de pupa y la medición de la pigmentación de las alas de Drosophila guttifera.J. Vis. Exp. (2018).

Este artículo describe una técnica para eliminar el pupario de un insecto mientras se mantiene la pupa interior intacta y, por lo tanto, apta para una investigación más profunda. El protocolo de ejemplo muestra el procedimiento con Drosophila guttifera; sin embargo, esta técnica es aplicable a otras especies de Drosophila.

Protocolo

Este protocolo es un extracto de Fukutomi et al., Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018).

1. Eliminación del pupario

NOTE Las pupas de Drosophila están cubiertas por una estructura llamada pupario. Un insecto de Muscomorpha (moscas) no muda su cutícula larvaria en la pupa; En cambio, endurece la cutícula después de la apólisis y la usa como una cubierta protectora de la pupa, el pupario. Una pupa que reside dentro de un pupario tiene una verdadera cutícula de pupa, que es muy suave y frágil. Antes de que se produzca la apolisis alrededor de P4(ii), el epitelio y el pupario están unidos y, por lo tanto, es muy difícil eliminar el pupario sin dañarlo. Después de P5, la extracción del pupario es laboriosa, pero útil para la observación morfológica y la definición de los estadios de pupa. El proceso se lleva a cabo de la siguiente manera.

Pega un pedazo de cinta adhesiva de doble cara en un pedazo de toalla de papel.
Coloque una pupa en la cinta de doble cara con el lado ventral hacia arriba (Figura 1A).
Localiza el espacio entre la cara anterior del pupario y la pupa interna. Agarre y retire el pupario alrededor de este espacio con pinzas y exponga el lado anterior de la cabeza de la pupa.
Inserte la punta de una pinza moviéndola paralela al eje antero-posterior. Levante la punta de las pinzas para romper localmente el pupario. Repite esta acción hasta que la rotura llegue a la parte posterior del pupario. Asegúrese de que también se forme un espacio entre el pupario y las patas de la pupa, y rompa el lado ventral del pupario y minimice el daño a la pupa interna (Figura 1B).
Después de romper el pupario tanto como sea posible, saque la pupa con un pincel fino (#5/0) (Figura 1C).
Coloque la pupa sobre un trozo de papel de seda que se haya humedecido con ddH₂O y se coloque en una placa de Petri de plástico (diámetro 60 mm x altura 15 mm). Tome fotografías lo antes posible porque la pupa expuesta es vulnerable y se seca fácilmente.

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Resultados

Diagrama de disección de insectos, etapas: cortar y quitar, cortar y abrir, extraer con pincel.
Figura 1. Ilustración de la extracción del pupario.(A) Coloque una pupa con el lado ventral hacia arriba sobre un trozo de cinta adhesiva de doble cara. Retira la parte anterior del pupario. (B) Romper el pupario con pinzas desde el lado ventral. (C) Después de romper el pupario, sa...