Drosophila melanogaster (mosca de la fruta)

Debido a su gran tamaño y organización relativamente simple, las células nodriza de Drosophila son ideales para estudios de imágenes de células vivas. Este video describe un método de microinyección para la administración de compuestos exógenos en las células, y el protocolo presentado demuestra el procedimiento con sondas de oligonucleótidos fluorescentes llamadas balizas moleculares (MB) que se utilizan para visualizar transcripciones endógenas de ARNm.

El embrión de Drosophila está rodeado por membranas externas protectoras. Para acceder al embrión, a menudo se extirpa el corion, la más externa de las membranas. Este video describe un método comúnmente utilizado de decorionación usando hipoclorito de sodio. El protocolo de ejemplo muestra el procedimiento empleando técnicas estériles necesarias para la cría de animales axénicos o gnotobióticos.

La inmunotinción de ovocitos en etapa tardía de Drosophila puede resultar desafiante debido a las membranas circundantes de los ovocitos. Este vídeo describe un método de alto rendimiento para la obtención de ovocitos, su fijación y la extracción de membranas para la inmunotinción. El protocolo presentado demuestra estas técnicas con ovocitos en etapa tardía utilizados para visualizar diferentes etapas de la meiosis.

Este video describe un método para eliminar mecánicamente las membranas de corion y vitelina de ovocitos maduros de Drosophila previamente fijados. El protocolo presentado muestra una demostración detallada del procedimiento que produce ovocitos compatibles con ensayos de hibridación fluorescente in situ.

Este video describe cómo realizar microinyecciones que administran reactivos en embriones vivos de Drosophila. Los investigadores pueden utilizar este método para introducir compuestos exógenos como ácidos nucleicos y proteínas durante las primeras etapas del desarrollo embrionario. El protocolo presentado demuestra cómo configurar y realizar el procedimiento para la inyección de cualquier reactivo soluble, en este caso, una proteína fluorescente para experimentos de imágenes en vivo.

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

Este video muestra un método para probar la hipoxia en larvas de Drosophila evaluando sus habilidades de excavación y tunelización. Con esta técnica, los investigadores pueden distinguir las larvas que experimentan privación de oxígeno de las que tienen déficits de desarrollo. El protocolo de ejemplo muestra la configuración de este ensayo.

Al teñir discos imaginales de Drosophila, a menudo se realiza una disección aproximada en la que los discos quedan expuestos pero permanecen unidos al cuerpo. Una vez teñidos, los discos de interés se aíslan y se montan. El protocolo de ejemplo muestra un procedimiento para la disección y el montaje del disco imaginal del ala.

La unión neuromuscular de Drosophila (NMJ) se utiliza como modelo para estudiar la morfología y función de las sinapsis. Este video describe características importantes que los investigadores cuantifican para caracterizar el NMJ. El protocolo de ejemplo muestra un software capaz de realizar la cuantificación automáticamente.

Este video describe la ablación de axones con láser de dos fotones en una larva de Drosophila melanogaster y un ejemplo de protocolo para inducir lesiones e imágenes del sitio de la lesión.

Este video describe cómo preparar filetes de larva utilizados para visualizar las neuronas sensoriales de arborización dendrítica (da) y sus células epidérmicas asociadas. El protocolo presentado muestra en detalle cómo eliminar el tejido muscular de la pared corporal mientras se preserva la morfología de las células, lo que mejora la inmunotinción y la visualización de las neuronas da y las células epidérmicas que de otro modo estarían oscurecidas.

La hemolinfa de Drosophila sirve como sangre y líquido intersticial, circulando por todo el cuerpo durante las etapas de larva y adulto. En este vídeo se describe un protocolo de recogida de hemolinfa larvaria con el fin de cuantificar las células circulantes.

Las larvas de Drosophila son sensibles a la luz y responden a los cambios en la luz circundante. Este video describe un ensayo que evalúa su capacidad para evitar la luz, llamado ensayo de punto de luz. El protocolo presentado muestra cómo configurar el ensayo con un LED de luz azul y muestra cómo registrar el comportamiento del animal en respuesta al encuentro con la luz.

Este video describe la glándula anular de Drosophila, una compleja estructura endocrina importante para la biosíntesis y secreción de ecdisteroides y otras hormonas. El protocolo presentado demuestra su disección, fijación e inmunotinción.

Las larvas de Drosophila tienen neuronas sensoriales dedicadas, nociceptores, cuya respuesta a estímulos térmicos potencialmente dañinos desencadena comportamientos aversivos, o los llamados "nocifensivos", en el animal. Este video describe un método para evaluar la nocicepción térmica mediante el registro del comportamiento de las larvas en respuesta a la aplicación local de una sonda de calor en la cutícula. Por lo tanto, este método se denomina ensayo de sonda de calor local.

Las moscas de la fruta Drosophila pueden distinguir pequeños cambios de temperatura y, por lo tanto, seleccionar ambientes con condiciones térmicas favorables. Este video describe un ensayo de comportamiento que prueba la preferencia de temperatura de las larvas de Drosophila en un gradiente térmico lineal.

Este video describe la glándula linfática Drosophila, el sitio principal de hematopoyesis en la larva de mosca, y muestra un ejemplo de protocolo para diseccionar y montar el órgano para inmunohistoquímica e imágenes fluorescentes.

Este artículo describe una técnica para eliminar el pupario de un insecto mientras se mantiene la pupa interior intacta y, por lo tanto, apta para una investigación más profunda. El protocolo de ejemplo muestra el procedimiento con Drosophila guttifera; sin embargo, esta técnica es aplicable a otras especies de Drosophila.

Este video describe cómo diseccionar y aislar el complejo ojo-cerebro de las pupas de Drosophila. El protocolo presentado demuestra que el procedimiento produce tejido de alta calidad, compatible con, por ejemplo, la inmunotinción, así como otros experimentos de expresión génica.

Los músculos de vuelo de Drosophila se utilizan como sistema modelo para el desarrollo muscular y la fisiología. Este video describe la musculatura de vuelo de los adultos y destaca un protocolo para diseccionar músculos de vuelo indirecto en desarrollo que son adecuados para la secuenciación de ARN de pupas.

Este video describe un ensayo de condicionamiento clásico que evalúa el aprendizaje y la memoria en Drosophila, llamado condicionamiento de cortejo. El ensayo se basa en la reducción del cortejo de los machos después de experimentar un rechazo por parte de una hembra preapareada no receptiva. El protocolo de ejemplo muestra una configuración para el procedimiento que se puede utilizar para evaluar la memoria a corto y largo plazo.

Este video describe un método simple para cuantificar la locomoción de la mosca y muestra el ensayo de escalada realizado. El ensayo de escalada con mosca es una prueba general de la función motora que se basa en una respuesta geotaxis negativa.

Este video describe la disección de las glándulas accesorias de las moscas macho y muestra un ejemplo en el que la glándula aislada se disociará en una suspensión de una sola célula.

Este video describe la anatomía general del ovario de Drosophila y presenta un método de disección de ovarios para obtener imágenes vivas o fijas.

Este artículo describe la disección de los túbulos de Malpighi anteriores (MT) de una mosca Drosophila hembra y un ejemplo de protocolo de Rossano et al. (2017) en el que los MT se preparan para la obtención de imágenes en vivo en una cámara de perfusión.

Este video describe el ensayo de la isla, un método conductual utilizado para estudiar la locomoción de Drosophila. El protocolo de muestra presenta una configuración para el ensayo compatible con el análisis de imágenes semiautomatizado.

Los científicos utilizan el protocolo de esperanza de vida de Drosophila para medir cómo diferentes condiciones experimentales afectan la longevidad de las moscas y generar curvas de supervivencia en el proceso para cuantificar los resultados experimentales. El protocolo de muestra presenta el ensayo que se aplica para estudiar los efectos sobre la longevidad de la exposición a concentraciones variables de sustancias químicas disruptoras endocrinas, o EDC, como el 17-α-etinilestradiol (EE2).

Este video describe un ensayo de alimentación para moscas de la fruta en el que se utiliza alimento coloreado para monitorear la alimentación y el efecto que los compuestos añadidos pueden tener en la actividad de alimentación. El protocolo de ejemplo prueba los efectos de varias sustancias químicas disruptoras endocrinas (EDC).

Este video describe un método para montar cerebros intactos de moscas adultas debajo de un portaobjetos de puente y muestra el protocolo realizado en cerebros inmunoteñidos para microscopía fluorescente.

Este video describe un método de cribado para identificar moscas Drosophila transgénicas, cuyo genoma fue modificado usando CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 es una poderosa herramienta de edición del genoma que revolucionó la forma en que los científicos pueden manipular el genoma de un organismo. En el protocolo de ejemplo, veremos cómo identificar mutantes generados por CRISPR, en los que una inserción de una secuencia de transactivación reemplaza el primer exón del gen sin ramas (bnl), creando así...

La microscopía electrónica de barrido (SEM) es una poderosa herramienta para obtener imágenes, principalmente, de las características de la superficie de una muestra biológica. Sin embargo, la preparación adecuada de la muestra es fundamental para obtener imágenes de calidad. Este vídeo se centra en los pasos de deshidratación y secado de la preparación de Drosophila adulta intacta para la SEM.

Este video describe cómo incrustar cabezas de Drosophila en parafina utilizando el método del collar, una técnica que prepara las cabezas de mosca para el corte en serie. Las secciones de parafina se utilizan para los exámenes histológicos de la anatomía del cerebro y para la evaluación de la neurodegeneración. El protocolo presentado demuestra cómo se pueden procesar múltiples moscas en una preparación, lo que aumenta la eficiencia del tiempo y minimiza los artefactos experimentales.

Este video describe cómo realizar una inyección de moscas adultas vivas e incluye un protocolo de ejemplo en el que se inyectan partículas marcadas y azul de tripano en el abdomen de las moscas para analizar la fagocitosis.

Este video describe el ensayo de preferencia gustativa, un método conductual utilizado para medir la atracción o evitación hacia soluciones coloreadas que tienen un sabor diferente al evaluar la coloración abdominal de la mosca después de la ingestión de la sustancia preferida. El protocolo presentado demuestra el procedimiento utilizado para medir la preferencia de las moscas hacia soluciones de diferentes concentraciones de sacarosa.

Este video describe el ensayo CApillary FEeder, o CAFE, un método conductual que mide la ingesta de alimentos y la preferencia de las moscas de la fruta sin restricciones. El protocolo presentado muestra cómo realizar el ensayo con una evaporación mínima de los capilares llenos de líquido utilizados para administrar el alimento y realizar un seguimiento de su ingesta.

Este video describe cómo diseccionar y aislar el cerebro adulto de Drosophila, un procedimiento necesario para visualizar el órgano, que de otro modo estaría oscurecido por la cutícula, el ojo y el tejido traqueal. El protocolo de ejemplo muestra una demostración detallada que produce preparaciones de alta calidad que se pueden utilizar para la inmunotinción y los métodos de imagen en la neurobiología de Drosophila.

La microbiota de Drosophila influye en el desarrollo, la inmunidad y la fisiología del animal. Este video describe un método para cuantificar las bacterias de las moscas mediante la determinación de las unidades formadoras de colonias a partir de preparaciones de cuerpo entero. El protocolo presentado muestra la técnica con moscas, criadas en condiciones gnotobióticas utilizando cuatro especies bacterianas.

Este video describe un método para diseccionar, fijar y montar la pata adulta de Drosophila mientras se conserva su neuromusculatura intacta para el análisis de imágenes.

Este video describe cómo rastrear moscas que caminan libremente para evaluar su capacidad general de locomoción. El protocolo presentado demuestra la configuración del ensayo y el análisis de datos mediante software de seguimiento de vídeo.

Este video describe un método para construir un aspirador de moscas, que se puede usar para transferir insectos entre recintos sin anestesia. El aspirador en el protocolo de ejemplo se preparó para un experimento para cuantificar los comportamientos individuales de...

Este video describe las imágenes de calcio in vivo en neuronas de Drosophila usando GCaMP. El clip de protocolo presentado muestra cómo registrar los cambios en la fluorescencia de GCaMP de las neuronas del cuerpo del hongo durante un experimento de acondicionamiento olfativo.

Las moscas de la fruta tienen un sistema olfativo complejo, pueden discriminar cientos de odorantes y utilizan su sentido del olfato para dirigir las decisiones de comportamiento. Este video describe el ensayo del olfatómetro de cuatro vías, un método para estudiar las respuestas del comportamiento olfativo en moscas. El clip de protocolo presentado muestra cómo manejar las moscas de prueba y cuáles son los pasos críticos mientras se realiza el ensayo.

La agresión es un comportamiento innato y la experiencia previa de lucha afecta a la estrategia de lucha y al resultado de las contiendas posteriores en moscas. Este video describe un ensayo utilizado para estudiar el comportamiento agresivo de Drosophila. El protocolo de ejemplo presenta el ensayo realizado en una configuración que elimina el manejo de moscas y, por lo tanto, reduce el estrés de los animales, que de otro modo afectaría el rendimiento de los sujetos.

Este video describe un método para probar el comportamiento exploratorio olfativo en la mosca de la fruta, llamado el laberinto Y. El clip de protocolo destacado muestra cómo configurar y realizar el ensayo.

Este video describe el sistema de monitor de actividad de Drosophila (DAM) utilizado para rastrear la actividad locomotora. Los investigadores utilizan los datos de actividad recopilados del DAM para estudiar los ritmos circadianos en las moscas de la fruta. El clip de protocolo destacado muestra cómo cargar moscas en el dispositivo y registrar los datos de actividad para los experimentos circadianos.

La optogenética permite el uso de la luz para manipular neuronas que están genéticamente modificadas para expresar opsinas específicas, proteínas sensibles a la luz cuya activación por luz desencadena un cambio en el estado de la neurona. En este trabajo describimos un abordaje optogenético en Drosophila utilizando la opsina Channelrhodopsin2. El protocolo de ejemplo presenta un conjunto de ensayos optogenéticos para estudiar los circuitos neuronales detrás del comportamiento de escape de la...

En este video, destacamos una disección del intestino adulto de Drosophila y una colección de intestinos medios adecuados para la disociación unicelular y FACS con el fin de aislar células madre intestinales.

Este video describe el corazón adulto de la mosca, o también llamado el vaso dorsal de Drosophila. El protocolo presentado muestra un procedimiento de disección para preparaciones de corazón vivo.

Las hembras de Drosophila eligen entre sustratos y seleccionan sitios que son atractivos para la puesta de huevos. Este video describe un ensayo conductual que pone a prueba su toma de decisiones, llamado ensayo de preferencia de puesta de huevos. El clip presentado muestra el procedimiento con una configuración personalizada, que permite a los investigadores no solo probar el comportamiento de muchas hembras al mismo tiempo, sino que también es compatible con la grabación de video y las...