Drosophila Acondicionamiento del cortejo: un método para evaluar el aprendizaje y la memoria en las moscas

Resumen

Fuente: Koemans, T. S., et al. El condicionamiento del cortejo de Drosophila como medida del aprendizaje y la memoria. J. Vis. Exp. (2017).

Este video describe un ensayo de condicionamiento clásico que evalúa el aprendizaje y la memoria en Drosophila, llamado condicionamiento de cortejo. El ensayo se basa en la reducción del cortejo de los machos después de experimentar un rechazo por parte de una hembra preapareada no receptiva. El protocolo de ejemplo muestra una configuración para el procedimiento que se puede utilizar para evaluar la memoria a corto y largo plazo.

Protocolo

Este protocolo es un extracto de Koemans et al., Drosophila Courtship Conditioning As a Measure of Learning and Memory, J. Vis. Exp. (2017).

NOTA: En el protocolo descrito a continuación, se describe una réplica de la recopilación, el entrenamiento y las pruebas. Con el fin de probar la reproducibilidad de los resultados, estos pasos deben repetirse en paralelo, en varios días y con grupos separados de moscas (Tabla 1). El protocolo se basa en un ciclo de vida de 10 días desde el huevo hasta el adulto, lo cual es normal cuando se crían moscas en condiciones constantes....

Resultados

Figura 1: Determinación del índice de cortejo y visión general experimental. (A) Imágenes que muestran el comportamiento estereotipado de cortejo masculino hacia una mosca hembra. Se muestran diferentes etapas del comportamiento de cortejo: orientación (I), seguimiento (II), vibración de las alas (extensión) y golpeteo (III), lamido (IV) e intento de cópula (V). (B

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
P{KK101437}VIE-260B	VDRC	101437	Dhat-at-RNAi en el fondo 60100
P{KK108109}VIE-260B	-	-	Control-RNAi en el fondo 60100 (regalo de K. Keleman)
w+, UAS-dcr2/yhh;; elav-Gal4 (III)	-	-	Línea de impulsores panneuronales
Contenedores para el cultivo de tejidos vegetales	VWR	960177	Viales de plástico de 175 mL
Filtros plegados	Whatman	10311643	Papel de filtro para ampliar el área en la que las moscas pueden pupar
Bloques de fondo plano (96 pocillos)	Qiagen	Año 19579	Se utiliza para bloques de viviendas
Película Adhesiva Transparente MicroAmp	Biosistemas Aplicados	4306311	Película adhesiva PCR como tapa en bloques de fondo plano
Hoja de afeitar	-	-	Cualquier rasguño servirá
Needle	-	-	0,8 mm de diámetro
Aspirador	-	-	Corta la punta de una pipeta de 1 ml con unas tijeras para obtener dos piezas. La punta estrecha de la punta de la pipeta se coloca como entrada de moscas en una manguera flexible de ~80 cm. Para evitar que una mosca entre en la manguera, se coloca un trozo normal de algodón o una pequeña mirilla de malla entre la punta y la manguera. La otra mitad de la punta de pipeta se puede utilizar como boquilla en el extremo de la manguera.
Cámaras de cortejo	-	-	el archivo S1 se puede abrir con el software CAD indicado
Videocámara	Sony	-	Especificaciones de la cámara: >4 millones de píxeles, Full HD.
			Para la cuantificación manual, cualquier dispositivo de grabación de video simple tiene el potencial de producir un video de calidad suficiente para observar el comportamiento de cortejo con precisión. Para la cuantificación automatizada, es probable que haya diferentes requisitos según el software que se vaya a utilizar, y los usuarios deben investigar esto a fondo si se desea la cuantificación automatizada.
Name	compañía	Número de catálogo	Comentarios
power food
Agar	sigma	A7002
Levadura	Bruggeman	-
Extracto de levadura	MP biomédica	0210330391
Peptone	sigma	P6838
Sacarosa	sigma	S9378
Glucosa	sigma	G7021
MgSO4	sigma	M2643
CaCl2	Merck	1023780500
Metilparabeno (PRECAUCIÓN)	sigma	H5501
Ácido propiónico (PRECAUCIÓN)	sigma	Página 1386
Agua desmineralizada	-
Pasta de levadura	-		Mezcla de granos de levadura y agua en una proporción de 1:1
Name	compañía	Número de catálogo	Comentarios
comida normal
Agar	MP biomédica	215017890
Levadura	Bruggeman	-
Harina de maíz	de Molen	-
Sugar	de Molen	-
Metilparabeno (PRECAUCIÓN)	sigma	H5501
Ácido propiónico (PRECAUCIÓN)	sigma	Página 1386
Agua desmineralizada	-