Ensayo de escalada con mosca: un método para probar la locomoción general en Drosophila melanogaster

Resumen

Fuente: Gevedon, O., et al. Detección genética directa in vivo para identificar nuevos genes neuroprotectores en Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe un método simple para cuantificar la locomoción de la mosca y muestra el ensayo de escalada realizado. El ensayo de escalada con mosca es una prueba general de la función motora que se basa en una respuesta geotaxis negativa.

Protocolo

Este protocolo es un extracto de Gevedon et al., Cribado genético directo in vivo para identificar nuevos genes neuroprotectores en Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Ensayo de escalada (Adaptado de Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Validar el ensayo de escalada. En este estudio, pruebe el ensayo de escalada basado en la metodología previamente descrita por Ali et al., utilizando moscas Elav^C155>UAS-Tau^R406W (que exhiben tasas de aprobación de escalada más bajas) y Elav^C155>UAS-GFP (control) y Elav^C155>UAS-mCherry (control).
2. Coloque las moscas en una cámara de prueba, una línea a la vez (no use anestesia con CO₂) y deje que se recuperen durante 5 minutos. Si la prueba se realiza en días diferentes, realice el ensayo a la misma hora del día. En este estudio, todos los ensayos de escalada se realizaron por la tarde para controlar los efectos circadianos sobre la locomoción.
   NOTE Evite exponer las moscas a la luz solar directa cuando realice la prueba; Esto interferirá con su capacidad para trepar.
3. Golpee con fuerza la cámara (marcada con el lado hacia abajo) sobre una alfombrilla de ratón colocada sobre una superficie sólida 3 veces para que todas las moscas comiencen el ensayo en la parte inferior. Observe la locomoción de las moscas durante un período de 10 s.
4. Registre el número de moscas que alcanzan o pasan la línea de 5 cm dentro de este tiempo, así como el número total de moscas analizadas. Repita el protocolo, esperando 1 minuto entre cada intento, para un mínimo de 3 réplicas de ensayo por línea.
   NOTE En el presente estudio, cada vial contenía entre 2 y 19 moscas para el cribado inicial (moscas macho) y entre 6 y 21 moscas para el análisis de deficiencia de mutantes de líneas femeninas cruzadas.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
VWR® Drosophila Vial; Estrecho	VWR	75813-160
Cinta de etiquetado de laboratorio de uso general de VWR®	VWR	89097-912
Alfombrilla de ratón estándar
Stereoscope	Motic		Modelo SMZ-168
Incubadora de Drosophila	VWR	89510-750
R