Drosophila Disección del disco imaginal de las larvas: un método para observar el desarrollo de los epitelios

Resumen

Fuente: Morimoto, K. y Tamori, Y. Inducción y diagnóstico de tumores en el epitelio del disco imaginal de Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Al teñir discos imaginales de Drosophila, a menudo se realiza una disección aproximada en la que los discos quedan expuestos pero permanecen unidos al cuerpo. Una vez teñidos, los discos de interés se aíslan y se montan. El protocolo de ejemplo muestra un procedimiento para la disección y el montaje del disco imaginal del ala.

Protocolo

Este protocolo es un extracto de Morimoto y Tamori, Inducción y diagnóstico de tumores en el epitelio del disco imaginal de Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).

1. Disección de larvas

1. Recoja las larvas errantes del tercer estadio con un palo de madera o pinzas romas, las genotipee con marcadores fluorescentes apropiados (por ejemplo, EGFP) bajo un microscopio estereoscópico de fluorescencia y colóquelas en una placa de disección con PBS (solución salina tamponada con fosfato).
2. Lavar las larvas en PBS pipeteando con pipetas de transferencia de plástico de 2 mL.
3. Pellizca ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Reactivos
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Wako	162-19321
TritonX-100	Wako	De los 168 a 11805
Formaldehído	Wako	064-00406
albúmina sérica bovina	sigma	A7906
Suero de cabra normal	sigma	G6767
medio de montaje, Vectashield	Laboratorios de vectores	H-1000
DAPI	sigma	D9542
ratón-anti-Dlg 4F3	Banco de Hibridomas de Estudios del Desarrollo	4F3 anti-discos grandes, RRID:AB_528203	diluir en PBTG, 1:40
ratón-anti-MMP1	Banco de Hibridomas de Estudios del Desarrollo	3A6B4, RRID:AB_579780	3 mezclados 1:1:1 y diluidos en PBTG, 1:40
ratón-anti-MMP1	Banco de Hibridomas de Estudios del Desarrollo	3B8D12, RRID:AB_579781	3 mezclados 1:1:1 y diluidos en PBTG, 1:40
ratón-anti-MMP1	Banco de Hibridomas de Estudios del Desarrollo	5H7B11, RRID:AB_579779	3 mezclados 1:1:1 y diluidos en PBTG, 1:40
ratón-anti-atubulina	Banco de Hibridomas de Estudios del Desarrollo	AA4.3, RRID:AB_579793	diluido en PBTG, 1:100
Alexa Fluor 546 Faloidina	Sondas moleculares	A22283	diluido en PBS, 1:40
anticuerpo IgG anti-ratón de cabra, Alexa Fluor 546	Sondas moleculares	A11030	diluido en PBTG, 1:400
Cepas de moscas
sd-Gal4	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#8609	recombinado con UAS-EGFP
upd-Gal4	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#26796	recombinado con UAS-EGFP
UAS-lgl-RNAi	Centro de ARNi de Drosophila en Viena	#51247
UAS-scrib-RNAi	Centro de ARNi de Drosophila en Viena	#105412
UAS-RasV12	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#64196
UAS-Yki3SA	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#28817
hsFLP	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#6
Act>CD2>GAL4 (GAL4 abatible)	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#4780	recombinado con UAS-EGFP
UAS-EGFP	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#5428	Cromosoma X
UAS-EGFP	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#6658	Tercer cromosoma
UAS-Dicer2	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#24650	Segundo cromosoma
UAS-Dicer2	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	#24651	Tercer cromosoma
vkg-GFP	Morin et al. 2001		Trampa de proteínas GFP