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Este protocolo es un extracto de Koyle et al., Criando la mosca de la fruta Drosophila melanogaster bajo condiciones axénicas y gnotobióticas, J. Vis. Exp.(2016).
1. Preparar jaulas para poner huevos
- Haga platos de agar jugo de uva calentando en el microondas 100 ml de agua, 10 g de levadura de cerveza, 10 g de glucosa y 1 g de agar. Llevar a ebullición 3 veces en el paso 1.1 y añadir 10 g de concentrado de zumo de uva congelado para aumentar la visibilidad de los huevos en la placa de agar.
- Cuando el agar se haya enfriado a 55 °C, vierta 20 ml en placas de Petri de 100 mm y deje que se solidifique.
- Cubra la superficie de las placas de agar con una pasta de levadura mezclando 1 g de levadura de cerveza con 15 g de agua. Vierta la pasta de levadura en la placa de agar asegurándose de que la superficie esté cubierta, luego vierta el exceso, dejando un residuo fino de levadura. Si se utilizan varias placas, la pasta se puede verter secuencialmente en varias placas.
- Transfiera las placas de agar al fondo de una jaula.
NOTA: Un recipiente de delicatessen de 32 oz es un buen sustituto de las jaulas acrílicas para moscas.
- Haga tapas para recipientes de delicatessen de 32 oz cortando un agujero en la parte superior y pegando una malla transpirable sobre el agujero con pegamento no tóxico. Si el pegamento es soluble en agua, evite la exposición del agua a la tapa.
- Transfiera 200-300 moscas al recipiente y cúbralas con una tapa. Cubra el orificio protegido por la malla con una tapa de placa de Petri vacía para evitar la evaporación de la superficie del agar y agregue un papel de seda húmedo dentro de la tapa si lo desea. Incubar moscas a 25 °C durante la noche durante 16-20 horas.
2. Recoger huevos
- Prepare un colador para la recolección de huevos colocando una malla de nailon en un casquillo de plástico.
- Para recuperar el plato con huevos, retira las moscas de la jaula transfiriéndolas a un recipiente vacío. Si se van a utilizar las mismas moscas al día siguiente, transfiéralas inmediatamente a una nueva jaula que contenga un plato de agar jugo de uva recién fermentado. Las moscas se pueden usar durante 3-5 días consecutivos
- Retire las moscas muertas del agar con un pincel limpio, teniendo cuidado de no romper el agar.
- Recoja los huevos enjuagando la placa de agar con agua destilada, cepillando suavemente los huevos de la superficie del agar y vertiendo la suspensión sobre la malla. Repita 3-4 veces hasta que todos o la mayoría de los huevos se hayan retirado de la placa de agar.
3. Huevos decorionados y transferencia a dieta estéril
- Prepare la cabina de bioseguridad rociando el interior (incluidos los lados) con etanol al 70%. Limpie la parte inferior con un pañuelo de laboratorio y esterilice la capucha con luz ultravioleta durante ~ 15 minutos. Esterilice todos los suministros no biológicos (recipientes de muestras, pincel, pinzas, contenedor de desechos, 400 ml de agua esterilizada y 100 ml de hipoclorito de sodio al 0,6%) rociándolos con etanol y colocándolos inmediatamente en la cabina de bioseguridad. Esterilizar con luz ultravioleta durante 15 min.
- Comience el primero de los 2 lavados con hipoclorito de sodio colocando el casquillo con los huevos en un vaso de muestra de 120 ml u otro recipiente estéril. Vierta lentamente ~ 90 ml de solución de hipoclorito de sodio al 0,6% en el casquillo hasta justo debajo del borde.
- Enjuague los huevos durante 2.5 min. Vuelva a suspender periódicamente los huevos usando pinzas para mover el casquillo hacia arriba y hacia abajo en la solución de hipoclorito.
- Transfiera el casquillo directamente a un segundo recipiente de muestras, precargado con lejía de 90 ml, dentro de la cabina de bioseguridad.
- Repita el paso 3.3 dentro del gabinete de bioseguridad. Al final del segundo tratamiento de blanqueo, los huevos deben comenzar a adherirse a los lados del casquillo.
- Lleve a cabo los pasos 3.7-3.8 en el gabinete de bioseguridad.
- Deseche la lejía y lave el casquillo con agua estéril 3 veces. Vuelva a suspender los huevos varias veces durante cada lavado moviendo el casquillo con pinzas. Al final del tercer lavado, la mayoría de los huevos deben estar adheridos al costado del casquillo.
- Usando un pincel esterilizado en etanol, transfiera los huevos del costado del casquillo a la dieta estéril. Transfiera los huevos individualmente o en lotes pequeños. Trate de consumir de 30 a 50 huevos por vial. Deje las tapas sueltas para permitir que el oxígeno ingrese al tubo.