$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
El siguiente protocolo es un extracto de Kudumala et al, Parálisis inducida por la natación para evaluar la señalización de dopamina en Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp.(2019).
>SWIP
NOTA: Describimos el método manual de evaluación de SWIP en gusanos de tipo salvaje tratados con AMPH. También discutimos brevemente el seguimiento de gusanos y un análisis adicional de la cinética de los gusanos utilizando un rastreador de gusanos automatizado y un software de seguimiento que fueron descritos previamente por Hardaway et al.
- Método manual para probar SWIP
- Alícuota 40 μL de solución de sacarosa de 200 mOsm/L con o sin 0,5 mM AMPH en una placa puntual de vidrio. Bajo el estereoscopio, recoja de 8 a 10 gusanos de etapa L4 tardía con un pico de pestañas o platino y sumerja el pico en la placa que contiene la solución hasta que los gusanos se muevan del pico y naden hacia la solución. Anote el número de gusanos recogidos en el pozo, inicie el temporizador, observe y registre el número de gusanos que exhiben SWIP en cada marca de minuto.
- Copie los datos sin procesar en una hoja de cálculo y calcule el porcentaje de gusanos paralizados dividiendo el número de gusanos paralizados en cada minuto por el número total de gusanos analizados a lo largo del ensayo y multiplíquelo por 100. Copie los valores porcentuales en cualquier software estadístico y de gráficos y trace los datos con valores porcentuales en el eje Y y tiempo en el eje X utilizando el formato de gráfico XY.
- Realizar un ANOVA de dos factores seguido de un análisis post-hoc (p. ej., post-test de Bonferroni) para probar la significación estadística entre el control, los grupos de AMPH y el tiempo de tratamiento.
- Análisis automatizado de SWIP
- Realice análisis automatizados en un solo gusano a la vez. El protocolo para configurar la cámara, el software de rastreo de gusanos y el script para ejecutar el análisis del software de seguimiento se describen en detalle en Hardaway et al.
- Brevemente, coloque un solo hermafrodita de etapa L4 tardía en una placa puntual de vidrio utilizando un palillo de pestañas, como se describe en el método manual en la sección 1.1.2. Grabe videos de natación de un gusano a la vez y use el software de seguimiento de gusanos para calcular la frecuencia de las curvas del cuerpo.
- Siga el script proporcionado con el software de seguimiento para obtener la frecuencia de agitación de gusanos y generar mapas de calor a partir de los datos de agitación de gusanos.