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Lee y Kang, Medición del efecto de los productos químicos en el crecimiento y la reproducción de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).
>1. Ensayo de puesta de huevos de C. elegans
- Incubar los huevos sincronizados con la edad en la placa NGM que contiene DMSO o etopósido durante 64 h (antes del primer parto) hasta la etapa de adulto joven a 20 °C.
NOTA: Es opcional usar los gusanos de los experimentos de medición de crecimiento. Es conveniente hacer la medición del crecimiento y el ensayo de puesta de huevos juntos.
- Transfiera 5 lombrices adultas a las nuevas placas NGM sin productos químicos (condición 1, tratamiento químico dentro de un cierto período de tiempo, desde los huevos hasta la etapa de adulto joven) o a la nueva placa NGM que contenga el mismo pretratamiento químico (condición 2, exposición continua a productos químicos durante todo el período experimental), y luego incube durante 24 h.
NOTA: Se recomienda hacer réplicas utilizando 3-5 placas NGM para cada tratamiento; Estas réplicas se pueden utilizar para el análisis estadístico.
- Transfiera a la nueva placa NGM como se describe anteriormente y cuente el número de huevos todos los días. Cuenta los gusanos que se arrastraron, murieron y nacieron internamente.
- Repita estos pasos hasta que los gusanos no pongan más huevos, generalmente en 5 días.
- Calcule el número de huevos puestos por lombriz de cada plato y sume estos valores todos los días durante 5 días para determinar el número total de huevos puestos.
NOTA: Excluja del cálculo el número de gusanos que se arrastraron y eclosionaron internamente.