Ensayo de puesta de huevos: un método para cuantificar el comportamiento de puesta de huevos de C. elegans

Resumen

Fuente: Lee, S. Y. y Kang, K. Medición del efecto de los productos químicos en el crecimiento y la reproducción de Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2017).

C. elegans El comportamiento de puesta de huevos puede proporcionar información importante en estudios de desarrollo, reproductivos y anatómicos. Este video presenta los pasos importantes de un ensayo de puesta de huevos y muestra un experimento de muestra en el que se prueba la toxicidad reproductiva de un medicamento.

Protocolo

Lee y Kang, Medición del efecto de los productos químicos en el crecimiento y la reproducción de Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2017).

>1. Ensayo de puesta de huevos de C. elegans

1. Incubar los huevos sincronizados con la edad en la placa NGM que contiene DMSO o etopósido durante 64 h (antes del primer parto) hasta la etapa de adulto joven a 20 °C.
   NOTA: Es opcional usar los gusanos de los experimentos de medición de crecimiento. Es conveniente hacer la medición del crecimiento y el ensayo de puesta de huevos juntos.
2. Transfiera 5 lombrices adultas a las nuevas placas NGM sin productos químicos (condición 1, tratamiento químico dentro de un cierto período de tiempo, desde los huevos hasta la etapa de adulto joven) o a la nueva placa NGM que contenga el mismo pretratamiento químico (condición 2, exposición continua a productos químicos durante todo el período experimental), y luego incube durante 24 h.
   NOTA: Se recomienda hacer réplicas utilizando 3-5 placas NGM para cada tratamiento; Estas réplicas se pueden utilizar para el análisis estadístico.
3. Transfiera a la nueva placa NGM como se describe anteriormente y cuente el número de huevos todos los días. Cuenta los gusanos que se arrastraron, murieron y nacieron internamente.
4. Repita estos pasos hasta que los gusanos no pongan más huevos, generalmente en 5 días.
5. Calcule el número de huevos puestos por lombriz de cada plato y sume estos valores todos los días durante 5 días para determinar el número total de huevos puestos.
   NOTA: Excluja del cálculo el número de gusanos que se arrastraron y eclosionaron internamente.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Caenorhabditis elegans N2	Centro de Genética de Caenorhabditis (CGC)		Tipo salvaje
Dimethyl sulfoxide	Sigma, Estados Unidos	D2650
Escherichia coli OP50	Centro de Genética de Caenorhabditis (CGC)
Etoposide	Sigma, Estados Unidos	E1383
35 × placa de Petri de 10 mm	SPL Ciencias de la Vida, Corea del Sur	10035
Microscopio estereoscópico	Nikon, Japón	SMZ800N