C. elegans Disección de blastómeros: un método para extraer la cáscara del huevo y disociar las células embrionarias

Abstract

Fuente: Hsu, C. R., et al. Reconstitución in vitro de patrones de contacto celular espacial con blastómeros embrionarios aislados de Caenorhabditis elegans y perlas adhesivas de poliestireno.J. Vis. Exp.(2019).

Este video presenta un método para aislar blastómeros de C. elegans de embriones tempranos. Las células resultantes son adecuadas para cultivos celulares o experimentos ex vivo.

Protocol

Este protocolo es un extracto de Hsu et al, Reconstitución in vitro de patrones de contacto celular espacial con blastómeros embrionarios aislados de Caenorhabditis elegans y perlas adhesivas de poliestireno, J. Vis. Exp.(2019).

1. Aislamiento de blastómero embrionario
2. Use guantes y bata de laboratorio para evitar cortes y contacto con la solución blanqueadora.
   1. Sujete cada extremo de un microcapilar (capacidad; 10 μL) con la mano derecha e izquierda.
   2. ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Conjunto de tubo aspirador	Drummond	21-180-13	Para el aislamiento de blastómeros.
Cepa de Caenorhabditis elegans: N2, tipo salvaje	Centro de Genética de Caenorhabditis	N2	Cepa utilizada en este estudio
Cepa de Caenorhabditis elegans: KSG5, genotipo: zuIs45; itIs37	En casa	KSG5	Cepa utilizada en este estudio
Mircopipets calibrados, 10 μL	Drummond	21-180-13	Para el aislamiento de blastómeros
CD Concentrado de Lípidos	Tecnologías de la Vida	11905031	Para el aislamiento de blastómeros. Trabajo en la campana de cultivo de tejidos.
Clorox	Clorox	N. A.	Para el aislamiento de blastómeros. Abra un frasco nuevo cuando el tratamiento con hipoclorito no funcione bien.
Soporte de cubreobjetos	En casa	N.D.	Para el aislamiento de blastómeros.
Microscopio de disección: Zeiss Stemi 508 con soporte M. La fuente de luz es LED incorporada. El aumento del ocular es de 10X.	Carl Zeiss	Stemi 508	Para el aislamiento de blastómeros.
Suero bovino fetal, Qualified One Shot, origen Canadá	Gibco	A3160701	Para el aislamiento de blastómeros. Trabajo en la campana de cultivo de tejidos.
Agujas hipodérmicas de deslizamiento de precisión y uso general, calibre 25	Bd	14-826AA	Para el aislamiento de blastómeros
Inulina	Alfa Aesar	AAA1842509	Para el aislamiento de blastómeros
MEM Solución Vitamínica (100x)	Gibco	11120052	Para el aislamiento de blastómeros.
Portaobjetos multiprueba 10 pozos	MP Biomedicals	ICN6041805	Para el aislamiento de blastómeros
Penicilina-estreptomicina (10.000 U/mL)	Gibco	15140148	Para el aislamiento de blastómeros.
Polivinilpirrolidona	Biorreactivos de Fisher	BP431-100	Para el aislamiento de blastómeros
Cloruro de potasio	Biotienda	POC888	Para el aislamiento de blastómeros
Medio estéril de Drosophila de Schneider	Gibco	21720024	Para el aislamiento de blastómeros. Trabajo en la campana de cultivo de tejidos.
Cloruro de sodio	Biotienda	SOD001	Para el aislamiento de blastómeros
Solución de hidróxido de sodio, 10 N	Fisher Chemical	SS255-1	Para el aislamiento de blastómeros
Filtros de jeringa, PTFE, no estériles	Basix	13100115	Para el aislamiento de blastómeros.
Tygon S3 Tubo de Laboratorio,, Formulación E-3603, Diámetro interior 3.175 mm	Plásticos de alto rendimiento Saint Gobain	89403-862	Para el aislamiento de blastómeros.
Tygon S3 Tubo de laboratorio,, Formulación E-3603, Diámetro interior 6,35 mm	Plásticos de alto rendimiento Saint Gobain	89403-854	Para el aislamiento de blastómeros.