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Ensayo de locomoción larvaria: método de alto rendimiento para estudiar la toxicidad neuroconductual de un compuesto en larvas de pez cebra

30 de abril de 2023

En este artículo

Resumen

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Fuente: Zhang B., et al. Estudiando los efectos neuroconductuales de los contaminantes ambientales en las larvas de pez cebra. J. Vis. Exp. (2020)

Este artículo describe la respuesta conductual del pez cebra a compuestos tóxicos mediante el monitoreo de la locomoción larvaria. El protocolo examina además un ejemplo de la respuesta de las larvas de pez cebra a los contaminantes ambientales.

Protocolo

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Preparación para la prueba de comportamiento

  1. Transfiera 800 μL de solución de exposición a cada pocillo de la microplaca de 48 pocillos.
    nota: Utilice 16 pocillos para cada grupo (es decir, la solución de control, 5 μg/L y 50 μg/L grupo).
  2. Utilice una punta de pipeta de 1 ml para transferir 200 μl de solución de exposición con una larva de la placa de Petri de vidrio a un pocillo de la microplaca de 48 pocillos.
  3. Transfiera 4 mL de solución de exposición a cada pocillo de la microplaca de 6 pocillos.
    nota: Utilice una microplaca de 6 pocillos para cada grupo.
  4. Utilice una punta de pipeta de 1 mL para transferir 200 μL de solución de exposición con dos larvas a cada pocillo de la microplaca de 6 pocillos.
    nota: Cada grupo tiene seis grupos que se repiten.
  5. Asegúrese de que la temperatura de la sala de pruebas sea de 28 °C 2 h antes de la prueba.
    nota: Las pruebas de comportamiento generalmente se realizan por la tarde.

2. Prueba de locomoción y ángulo de trayectoria

  1. Guarde el protocolo y apague la luz de la sala de pruebas.
  2. Aclimate las larvas en el sistema durante 10 minutos y haga clic en el botón "Experimentar" "Ejecutar" a su vez, luego elija la carpeta donde se guardan los archivos del experimento e ingrese el nombre del resultado.
  3. Haga clic en el botón "Fondo" "Inicio" a su vez para iniciar la prueba.
  4. Haga clic en el botón "Detener" de "Experimento" a su vez para detener el experimento cuando finalice la prueba.
    nota: El sistema muestra los datos probados cuando el sistema se detiene. Los datos incluyen la distancia rastreada en tres clases de velocidad y los números de ángulo de trayectoria en ocho clases de ángulo por minuto. Para la prueba de locomoción en el ejemplo presentado, se calcula la distancia total en cada período de luz (10 min) y se compara la diferencia entre el grupo de control y los grupos de tratamiento.
  5. Transfiera la microplaca de 48 pocillos a la incubadora de luz para otros experimentos.

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Microplaca de 48 pocillos Corning 3548Vivienda Embyros
Microplaca de 6 pocillos Corning 3471Vivienda Embyros
Zebrabox punto de vista ZebraBox Instrumento de comportamiento
ZebraLab punto de vista ZebraLab Software de comportamiento
pipeta Eppendorf 3120000267Solución de transferencia

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