Disección del intestino del pez cebra adulto: una técnica para analizar la absorción de compuestos

Resumen

Fuente: Jie J. et. al., Intubación oral de pez cebra adulto: un modelo para evaluar la absorción intestinal de compuestos bioactivos. J. Vis. Exp. (2018).

Este video describe la técnica de aislar el intestino para evaluar la absorción intestinal de compuestos bioactivos. En esta muestra, aislaremos el intestino de un pez cebra adulto para analizar la absorción de inmunoestimulantes.

Protocolo

1. Disección del intestino del pez cebra

1. Después de un período de tiempo especificado después de la intubación (por ejemplo, 5 h y/o 24 h), coloque a los peces usando una red en una solución de 300 mg/L de 3-aminobenzoato de etilo metanosulfonato (MS-222) para eutanasia. Asegúrese de que el opérculo deje de moverse y que no haya reflejo de pellizco de la cola. Cinco minutos es normalmente suficiente.
2. Recoja el animal sacrificado con una red y colóquelo en un papel de filtro.
   nota: El papel de filtro es muy útil para eliminar el tejido adhesivo a lo largo del intestino.
3. Con unas tijeras de disección afiladas, haga una incisión semicircular desde el ano hasta el opérculo y abra la incisión con pinzas finas. Corta ambos extremos del intestino, saca todos los órganos internos y colócalos sobre el papel de filtro.
   cautela: Trabaja rápidamente para reducir el metabolismo celular y la muerte.
   nota: Alternativamente, retire el tejido adhesivo en PBS y en hielo.
4. Separe el intestino de los órganos internos asegurándose de mantener su orientación (segmento intestinal anterior a posterior) y estírelo. Por lo general, el segmento anterior del intestino es más ancho que el segmento posterior. Tenga cuidado de obtener todo el intestino al diseccionar.
   nota: El extremo posterior es bastante fino y frágil en los peces pequeños y puede romperse, especialmente en los animales <0,7 g.
5. Enrolle el intestino sobre el papel de filtro con pinzas para separar el tejido adhesivo del intestino.
6. Proceda a preparar el intestino para varios análisis posteriores

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	polvo
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Papel de filtro	Laboratorio de filtros	RM14034252