Cocultivo 3D con interacción directa: cocultivo de células cancerosas con monocitos para estudiar su interacción

Resumen

Fuente: Espinoza-Sánchez, et al. Análisis de la comunicación entre monocitos y células primarias de cáncer de mama en un sistema tridimensional basado en extracto de matriz extracelular (ECME). J. Vis. Exp. (2018).

Este video describe el cocultivo en 3D de células de cáncer de mama con monocitos para estudiar su interacción en un entorno basado en extracto de matriz extracelular (ECME). Este método ayuda a estudiar características específicas como la degradación del colágeno, el reclutamiento de células inmunitarias y la invasión celular.

Protocolo

1. 3D co-cultivos con interacción directa

1. Marque las células BrC y los monocitos con diferentes colorantes fluorescentes antes del cultivo celular para permitir la clasificación independiente de cada linaje celular después del cultivo para el análisis de la expresión de ARNm y proteínas. Utilice derivados disponibles comercialmente de la cumarina y la rodamina que pasan libremente a través de la membrana celular de las células vivas. Un protocolo general para el etiquetado es el siguiente:
   1. Prepare una monocapa de células BrC de interés (2 × 10⁶ células en un matraz de cultivo de 25^cm2) y sustituya el medio....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
U937	Colección de Cultura Tipo Americana ATCC	CRL-1593.2	Línea celular monocítica/linfoma histiocítico
THP-1	Colección de Cultura Tipo Americana ATCC	TIB-202	Línea celular monocítica/leucemia monocítica aguda
MCF-10A	Colección de Cultura Tipo Americana ATCC	CRL-10317	Línea celular mamaria no transformada
MCF-7	Colección de Cultura Tipo Americana ATCC	HTB-22	Línea celular de cáncer de mama
MDA-MB-231	Colección de Cultura Tipo Americana ATCC	HTB-26	Línea celular de cáncer de mama
RPMI 1640 medio	GIBCO BRL Life Technologies	11875-093
DMEM/F12	GIBCO BRL Life Technologies	11039-021
Antibiótico/Antimicótico	GIBCO BRL Life Technologies	15240-062	100 U/mL de penicilina, 100 μg/mL de estreptomicina y 0,25 μg/mL de Fungizone
Suero Fetal Bovino	GIBCO BRL Life Technologies	16000-044
Suero de caballo	GIBCO BRL Life Technologies	16050114
0.05% Tripsina-EDTA 1X	GIBCO BRL Life Technologies	25300-062
PBS 1X (solución salina tamponada con fosfato	GIBCO BRL Life Technologies	20012-027
Factor de crecimiento epidérmico (EGF)	PeproTech	AF-100-15 (1,00 mg)
insulina	SIGMA-ALDRICH	I1882-100MG
hidrocortisona	SIGMA-ALDRICH	H088-5G
Toxina del cólera Vibrio cholerae	SIGMA-ALDRICH	C8052-1MG
Matrigel	Corning Inc	356237	Sarcoma de ratón Engelbreth-Holm-Swarm (EHS), extracto de matriz extracelular, Almacenar a -20 °C hasta su uso a 4 °C
Portaobjetos de cámara Lab-Tek con tapa (8 pocillos)	Nalge Nunc Internacional	177402