Almohadillas de grasa mamaria descelularizantes: Obtención de hidrogeles de matriz extracelular a partir de almohadillas de grasa mamaria

Resumen

Fuente: Alves et. al., Estudio de los efectos de la radiación tisular normal utilizando hidrogeles de matriz extracelular. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe una técnica de derivación de hidrogeles de matriz extracelular mediante la descelularización de almohadillas de grasa mamaria murina después de la irradiación ex vivo para estudios in vitro. Este hidrogel ayuda a imitar el entorno del tejido mamario in vivo después del tratamiento con radiación para estudiar el comportamiento de las células tumorales.

Protocolo

1. Descelularización

NOTA: Este procedimiento fue adaptado de métodos publicados anteriormente centrados en la descelularización adiposa, que incluían el detergente iónico desoxicolato de sodio en lugar de dodecil sulfato de sodio para eliminar el ADN de manera eficiente.

1. El día 1, retire las almohadillas de grasa mamaria congeladas o MFP a -80 °C y descongele a temperatura ambiente.
2. Una vez descongeladas, seque brevemente las impresoras multifunción con una toallita delicada. Pese las impresoras multifunción con una báscula analítica.
3. Con un par de pinzas con tijeras....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
10% Formalina Neutral Tamponada, Cubo con Espiga	VWR	16004-128
2-metilbutano	Alfa Aesar	Año 19387
Albúmina sérica bovina	Sigma-Aldrich	A1933-25G
Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco	Gibco	14040133
Compuesto Tissue-Plus O.C.T. de Fisher Healthcare	Fisher Científico	23-730-571	medio de inclusión de criostato
Kimtech Ciencia Kimwipes	Kimberly Clark		Toallitas para tareas delicadas
n-propanol (sin peróxido/secuenciación), Fisher BioReagents	Fisher Científico	BP1130-500
PBS (10X), pH 7.4	Calidad Biológica, Inc.	119-069-151	Solución salina tamponada con fosfato
Penicilina-Estreptomicina	Gibco	Números 15140-122
Ácido peracético	Sigma-Aldrich	77240-100ML
Tritón x-100	Sigma-Aldrich	X100-100ML	t-octilfenoxipolietoxietanol
Tripsina-EDTA (0,25%), rojo fenol	Gibco	25200-056
Richard-Allan Scientific Signature Series Hematoxylin 7211	Richard-Allan Científico	7211
Papel de filtro cualitativo Whatman, Grado 4	Whatman	De 1004 a 110	Papel de filtro cualitativo de grado 4
Xilenos (certificado ACS), Fisher Chemical	Fisher Científico	X5-5