Aumento de dosis: un método para desarrollar resistencia a los medicamentos en las células cancerosas

Resumen

Fuente: Yamaoka T. et al., Establecimiento y caracterización de tres líneas celulares de adenocarcinoma de pulmón PC-9 resistentes a Afatinib desarrolladas con dosis crecientes de Afatinib. J. Vis. Exp., 2019

El video describe el desarrollo de resistencia a los medicamentos en las células cancerosas al exponer las células a dosis crecientes de un medicamento después de calcular los valores de IC₅₀ del medicamento previamente con el ensayo MTT. El protocolo de muestra describe el proceso paso a paso del desarrollo de células resistentes a los medicamentos.

Protocolo

1. Establecimiento de tres líneas celulares PC-9 independientes resistentes a afatinib

1. Determinación de la concentración inicial de exposición a afatinib para células PC-9 mediante el ensayo de bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT).
   1. Cultivo de células PC-9 en un medio de crecimiento que contiene suero fetal bovino (10%), penicilina (100 U/mL) y estreptomicina (100 μg/mL) en una placa de 10 cm tratada con cultivo celular en una incubadora de CO₂ al 5% a 37 °C.
   2. Resuspenda las células PC-9 a 4 x 10⁴ células/mL en medio de crecimiento y luego siembre a 50....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
FBS	gibco	26140-079
Estreptococo de la pluma	gibco	Números 15140-163
placa de 10 cm tratada con cultivo celular	Violamo	2-8590-03
afatinib	Selleck	S1011
Microplaca de 96 pocillos	termo	130188
CellTiter 96	Promega	G4100	ensayo de proliferación de células no radiactivas; Solución de colorante y solución de solubilización/parada
Espectrofotómetro NanoDrop Lite	termo	Na	espectrofotómetro
Software GraphPad Prism v.7	GraphPad, Inc.	Na	Un software estadístico
Dmso	Wako	043-07216