Ensayo de xenoinjerto de pez cebra: un método para evaluar la eficacia anticancerígena de las terapias sobre la tumorigénesis en el pez cebra in vivo

Resumen

Fuente: Lee, J. Y et al.,Evaluación preclínica de la bioactividad de la cumarina anticancerígena OT48 mediante esferoides, ensayos de formación de colonias y xenoinjertos de pez cebra.J. Vis. Exp. (2018)

Este video describe el ensayo de xenoinjerto de pez cebra para evaluar la formación de tumores in vivo y estudiar el efecto de los agentes terapéuticos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Ensayo de xenoinjerto de pez cebra

NOTA: Este enfoque técnico se visualiza como un esquema (Figura 1).

1. Preparación de reactivos madre
   1. Prepare 1 L de 30x solución de Danieau: 1740 mM de NaCl, 21 mM de KCl, 12 mM de MgSO₄•7H2O, 18 mM de Ca(NO₃)₂ y 150 mM de HEPES. Ajuste el pH del tampón a 7,6 con un medidor de pH.
   2. Prepar....

Resultados

Figura 1: Diagrama esquemático del proceso general del ensayo de xenoinjerto de pez cebra.

....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
A549	ATCC	CCL-185	37 C°
RPMI 1640	Lonza	30096	4 C°
FBS	Biooeste	S1520-500	-20 C°
Penicilina-estreptomicina	Lonza	17-602E	-20 C°
matraz para cultivo celular T25	Spl	70025	Rt
matraz para cultivo celular T75	Spl	70075	Rt
Matraz para cultivo celular T175	Spl	71175	Rt
Tubo de 1,5 ml	Extragénico	Tubo-170-C	Rt
Placa de 24 pocillos	Spl	30024	Rt
Petridish	Spl	10100	Rt
Solución PBS	Hyclone	SH30256.02	Rt
Tripsina-EDTA	Gibco	25-300-054	4 C°
cloruro de sodio	Sigma-Aldrich	71382	Rt
Cloruro de potasio (KCL)	Sigma-Aldrich	P9541	Rt
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4.7H2O)	Sigma-Aldrich	M2773	Rt
Nitrato de calcio tetrahidratado (Ca(NO3)2)	Sigma-Aldrich	C1396	Rt
Solución HEPES	Sigma-Aldrich	H0887	Rt
3-aminobenzoato de etilo metanosulfonato (tricaína)	Sigma-Aldrich	E10521	Rt
Solución de rojo de fenol	Sigma-Aldrich	P0290	Rt
Metilcelulosa	Sigma-Aldrich	M0512	Rt
1-fenil-2-tiourea (PTU)	Sigma-Aldrich	P7629	Rt
Tinte CM-Dil	Invitrogen	C7001	-20 C°
Capilar de vidrio	Instrumentos de precisión mundial	TW 100F-4	Rt
Extractor de micropipetas	Instrumento de obturador, EE. UU.	P-97	Rt
Micro inyector	Instrumentos de precisión mundial	PV820	Rt
jeringa	KOVAX	1 ml	Rt
Micro cargador	Eppendorf	5242956003	Rt
Corredera de vidrio	Marienfeld	HSU-1000612	Rt
Microscopía de fluorescencia	Leica	DE/DM 5000B	Rt