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Artículo de método
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30 de abril de 2023
Fuente: Fleming Martinez, A. K., et al. Imitación y manipulación de la metaplasia pancreática acinar-ductal en cultivo celular tridimensional. J. Vis. Exp. (2019).
Este video describe la técnica utilizada para aislar las células acinares pancreáticas--células exocrinas-- que contienen una variedad de enzimas digestivas. Las células acinares primarias son útiles en el estudio ex vivo de la metaplasia acinar-ductal (ADM), un evento temprano en el desarrollo del cáncer de páncreas.
Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de Jove.
1. Aislamiento de células acinares
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Incubadora vibratoria a 37 °C | Termo Científico | SHKE4000-7 | |
| 5% CO2, 37 °C Incubadora | NUAIRE | NU-5500 | |
| Tubos de 50 ml | halcón | 352070 | |
| Almohadilla absorbente, 20" x 24" | Marca Pescadora | 1420662 | |
| Aguja deslizante de precisión BD 21G x 1/2 | Fisher Científico | 305167 | Uso como alfileres para la disección |
| Vaso de precipitados, 600 mL | Marca Pescadora | FB-101-600 | |
| centrífuga | Beckman Coulter | Centrífuga Allegra X-15R | |
| Colagenasa tipo I, Clostridium histolyticum | sigma | C0130-1G | Cree una solución de 100 mg/ml disolviendo el polvo en agua estéril de grado de biología molecular. Al descongelar una alícuota, diluir a 10 mg/ml, esterilizar con filtro y colocar alícuotas de 1 ml a -20 °C. |
| dexametasona | sigma | D1756 | Cree una solución de 4 mg/ml disolviendo el polvo en metanol, alícuota y almacenándolo a -20 °C. |
| Etanol, 200 grados | Laboratorios Decon | Artículo 2701 | |
| Suero Fetal Bovino | sigma | F0926-100mL | |
| fórceps | Herramientas de Bellas Ciencias | 11002-12 | |
| fórceps | Herramientas de Bellas Ciencias | 91127-12 | |
| Solución salina equilibrada de Hank (HBSS), sin calcio, sin magnesio, sin rojo fenol | Fisher Científico | SH3048801 | |
| Cubitera, rectangular | Fisher Científico | 07-210-103 | |
| Bolsas de muestras LAB GUARD (para ratones después de la disección) | Minigrip | SBL2X69S | |
| Parafilm | Bemis | PM992 | Denominada "película plástica de parafina" en el manuscrito |
| Pbs | Fisher Científico | SH30028.02 | |
| Penicilina-Estreptomicina | ThermoFisher Scientific | 15140122 | |
| Puntas de pipeta, 10 μl | Científico de EE. UU | 1110-3700 | |
| Puntas de pipeta, 1000 μl | Plásticos Olympus | 24-165RL | |
| Puntas de pipeta, 200 μl | Científico de EE. UU | 1111-1700 | |
| Pipet-Aid | Drummond | ||
| PIPETMAN Classic P10, 1-10 μl | Gilson | F144802 | |
| PIPETMAN Classic P1000, 200-1000 μl | Gilson | F123602 | |
| PIPETMAN Classic P20, 2-20 μl | Gilson | F123600 | |
| PIPETMAN Classic P200, 20-200 μl | Gilson | F123601 | |
| Pipetas, 10 ml | halcón | 357551 | |
| Pipetas, 25 ml | halcón | 357525 | |
| Pipetas, 5 ml | halcón | 357543 | |
| Malla de polipropileno, 105 μm | Laboratorios de espectro | 146436 | |
| Malla de polipropileno, 500 μm | Laboratorios de espectro | 146418 | |
| tijeras | Herramientas de Bellas Ciencias | 14568-12 | |
| tijeras | Herramientas de Bellas Ciencias | 14568-13 | |
| Bicarbonato de sodio (polvo blanco fino) | Fisher Científico | BP328-500 | |
| hidróxido sódico | Fisher Científico | S318-500 | |
| Inhibidor de la tripsina de la soja | Gibco | 17075029 | |
| espátula | Marca Pescadora | 21-401-10 | |
| Steriflip 50 ml, filtros de 0,22 micras | Millipore | SCGP00525 | |
| Colágeno de cola de rata tipo I | Corning | 354236 | |
| Waymouth MB 752/1 Medio (polvo) | sigma | W1625-10X1L | |
| Bote de pesaje, hexagonal, medio | Marca Pescadora | 02-202-101 |
