Ensayo de flujo extracelular en esferoides 3D: un método para medir la actividad metabólica de los esferoides de tumores pancreáticos

Resumen

Fuente: Noel, P., et al. Preparación y ensayo metabólico de cocultivos tridimensionales de esferoides de células de cáncer de páncreas y fibroblastos. J. Vis. Exp. (2017).

Este protocolo describe la técnica para realizar el ensayo de flujo extracelular en esferoides 3D generados a partir del cocultivo de células de cáncer de páncreas (Patu8902) y fibroblastos pancreáticos activados (PS1) para medir las dos principales vías productoras de energía, la glucólisis y la respiración mitocondrial.

Protocolo

1. Ensayo metabólico de esferoides tumorales pancreáticos en 3D para vías bioenergéticas utilizando el analizador de flujo extracelular

NOTA: En esta sección, se describe el análisis de las funciones metabólicas de los esferoides utilizando un analizador de flujo extracelular con microplacas de ensayo diseñadas específicamente para esferoides 3D.

1. Lavado y transferencia de esferoides de las placas de crecimiento a las microplacas de ensayo de esferoides.
   nota: Los esferoides se pueden utilizar para ensayos metabólicos cuando alcanzan un diámetro de ~500 μm.
   1. El ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placa repelente de celdas de 96 pocillos	USA Scientific/ Griener Bio-One	655970	placa de crecimiento esferoide
D-Glucosa	sigma	D9434
DPBS	Gibco	14190-144
Kit de prueba de esfuerzo de glucólisis	Tecnologías Agilent	103020-100
L-Glutamina	sigma	59202C
Kit de prueba de esfuerzo mitocondrial	Tecnologías Agilent	103015-100
Células Patu8902	Stock de laboratorio		células de adenocarcinoma ductal pancreático
Células PS1	Stock de laboratorio		Células estrelladas pancreáticas activadas
RPMI1640	Gibco	11875-093	medios de crecimiento para células, esferoides
Analizador de flujo extracelular SeaHorse XFe 96	Tecnologías Agilent		analizador de flujo extracelular
Piruvato de sodio	sigma	S8636
Medios XF Base	Tecnologías Agilent	102365-100	medios base para ensayos metabólicos en XFe 96