Modelo de ratón ortotópico fluorescente: implantación de células cancerosas que expresan GFP en ratones para evaluar la progresión tumoral in vivo

Resumen

Fuente: Moreno, J. A., et al. Modelo de ratón ortotópico fluorescente de cáncer de páncreas. J. Vis. Exp.(2016)

Este video muestra el protocolo para implantar ortotópicamente células de cáncer de páncreas que expresan proteínas fluorescentes verdes en el páncreas del ratón. El modelo ortotópico de ratón ayuda a investigar la eficacia de nuevas terapias en tumores primarios y metastásicos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de Jove.

1. Implante quirúrgico

NOTA: Asegúrese de que todos los materiales e instrumentos quirúrgicos sean estériles. Practica técnicas asépticas en todo momento.

1. Coloque una almohadilla térmica sobre la mesa y cúbrala con un paño estéril. Configure la máquina de anestesia y asegúrese de que todos los suministros estén al alcance de la mano.
2. Coloque el hocico del animal en la máscara de anestesia y configure la anestesia a 1 L/min de oxígeno e isoflurano al 2,5%.
3. Frote suavemente el flanco del animal con yodo y enjuague con etanol al 70%. Repite tres veces.
4. Confirme que el animal está completamente anestesiado pellizcando la pata trasera. El animal está completamente anestesiado y listo para la cirugía si no se observa ninguna respuesta. Sin embargo, si el animal se estremece, asegúrese de que haya suficiente anestesia en el vaporizador y permita que el animal tenga más tiempo para pasar completamente bajo anestesia.
5. Cargue aproximadamente 200 μl de la suspensión celular en una jeringa TB de 1,0 ml con una aguja de 18 G (previamente enfriada). Reemplace la aguja con una aguja de 27 G y vuelva a colocar hielo hasta que esté listo para usar.
6. Localice el área general del bazo (cuadrante superior izquierdo del abdomen) y con fórceps pellizque la piel en la parte superior de esa región. Con unas tijeras quirúrgicas haga una incisión de aproximadamente 1,0 cm para crear un bolsillo. Del mismo modo, pellizque el músculo liso en la parte superior del bazo y corte a través para acceder a la cavidad peritoneal.
7. Agarre suavemente el extremo caudal del bazo y sáquelo del cuerpo. El páncreas se unirá al bazo. Extienda el páncreas con un hisopo húmedo y estéril y localice la cola del páncreas.
8. Administre la inyección de 50 μl en la cola del páncreas, deje la aguja adentro durante 10 segundos y gire lentamente la aguja fuera del páncreas. Una implantación exitosa se verá como una burbuja superficial sin fugas.
9. Regrese el páncreas y el bazo a la cavidad peritoneal. Primero encierra el músculo y luego encierra la piel por separado. Use una sutura o grapa 6-0 para cerrar la incisión. Para evitar el dolor en el animal, administrar ketoprofeno por vía subcutánea (SC) (5 mg/kg) durante 24 horas. Alternativamente, administre buprenorfina sc (0,05 - 0,1 mg/kg) cada 12 horas durante un período de 36 horas.
10. Recuperar al animal de la anestesia y devolverlo a su jaula. También controle el dolor. Los animales deben recibir analgésicos en el momento de la cirugía preventiva (o incluso antes). Se debe proporcionar un alivio adicional del dolor a los animales que experimentan dolor de acuerdo con el protocolo IACCC o según lo prescrito por el veterinario tratante o la persona designada.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Desinfectante antiséptico Alcare o espumado	Steris	639680
Jeringa TB 27 g 1/2	Becton Dickinson	305620
Isoflurano	Blutler Schein	50562
Ketoprofeno	Salud Animal de Fort Dodge
Tijeras quirúrgicas, mayonesa recta de 5.5"	Henry Schein	22-1600
Línea celular PANC-1 GFP	Anticancerígeno, Inc
Sistema de imagen para animales pequeños: iBox Scientia	UVP, LLC. Upland, CA.		Sistema de Imagen de Pequeños Animales para observar el tumor fluorescente en animales vivos
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	39010
Línea celular PANC-1 GFP	Anticancerígeno, Inc
DPBS (solución salina tamponada de fosfato de Dubelcco)	Termo Ficher Sci	21300025