Monitorización del microambiente tumoral basada en PTM: un método para rastrear los cambios en la rigidez de la MEC mediante esferoides tumorales

Resumen

Fuente: Jones, D. P., et al. Medición longitudinal de la rigidez de la matriz extracelular en modelos tumorales 3D mediante microrreología de seguimiento de partículas. J. Vis. Exp. (2014).

Este protocolo describe una técnica para monitorear los cambios en la rigidez de la matriz extracelular mediante el uso de microrreología de seguimiento de partículas (PTM). Esto se hace mediante el cultivo de esferoides tumorales de páncreas en 3D en ECM con sondas fluorescentes integradas para el seguimiento y análisis de partículas de video.

Protocolo

1. Preparación de esferoides tumorales 3D incrustados en ECM

1. Prepare una estación de trabajo con los materiales necesarios dentro de una campana de flujo laminar.
2. Prepare una mezcla diluida de sondas trazadoras fluorescentes de 1 μm de diámetro modificadas con carboxilato añadiendo 2 partes de sondas de culata (2% de sólidos) a 25 partes de agua estéril.
3. Saca un frasco de 3,1 mg/ml de colágeno bovino del frigorífico y colócalo sobre hielo.
4. Alícuota 125 μl de colágeno en un vial vacío de 2 ml.
5. Añadir 50 μl de solución diluida de sonda trazadora al vial que contiene el colágeno y el vórtice brevemente ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Colágeno bovino tipo 1	BD Biosciences, San José, CA	354231
PANC-1	Cultivo Celular Tipo Americano, Manassas, VA	CRL1469	u otro tipo de célula apropiado
Microesferas fluorescentes	Life Technologies, Carlsbad, CA	906906
agarosa	Biorreactivos de Fisher, Waltham, MA	C12H18O9
NaOH	Biorreactivos de Fisher, Waltham, MA	NC0480985
Placas de imagen de 96 pocillos	Corning Inc., Corning, NY	3904
DMEM	Hyclone, Waltham, MA	SH30243.01	o medios de cultivo celular apropiados
Microscopio Zeiss AxioObsever	Zeiss, Oberkochen, Alemania		Incluye cámara de alta velocidad y software de imagen