Generación de un modelo de ratón PDOX de cáncer colorrectal: estudio de la progresión del cáncer colorrectal en un modelo murino

Resumen

Fuente: Moret, R. et al. Modelos de xenoinjertos ortotópicos derivados de pacientes para el crecimiento tumoral y el crecimiento tumoral y la metástasis espontánea del carcinoma de células uroteliales humanas. J. Vis. Exp. (2019).

Este video describe el protocolo para generar un modelo de ratón de cáncer colorrectal de xenoinjerto ortotópico derivado del paciente para estudiar la progresión de las células de cáncer colorrectal en ratones diabéticos/con inmunodeficiencia combinada grave (NOD/SCID) no obesos. Este modelo murino ayuda a comprender el crecimiento del tumor primario y el patrón de metástasis.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Cultivo de líneas celulares

1. Cultive células HK en medio RPMI-1640 completo suplementado con suero fetal bovino al 10%, 2 nM de glutamina, 100 U/mL de penicilina G y 100 mg/mL de estreptomicina a 37 °C en una incubadora humidificada con 5% de CO₂.
   nota: Las células HK son células dendríticas foliculares humanas normales y pueden cultivarse y expandirse durante ≤ 15 conductos in vitro.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
RPMI-1640 Medio	Colección de Cultura Tipo-Americana	110636
Isoflurano	Henry Schein Salud Animal	108333
D-Luciferina (150 mg/kg)	Perkin Elmer	122796
glutamina (2 nM)	Fisher Científico	35050061
Luc/RFP-lentivirus	De nuestros colaboradores. Ver referencia 13: Gills, J. et al. Un modelo de xenoinjerto ortotópico derivado de un paciente que permite la implantación, el crecimiento, la angiogénesis y la metástasis del carcinoma de células uroteliales humanas de alto grado del tumor de vejiga. Oncotarget. 9, 32718-32729, doi:10.18632/ oncotarget.26024 (2018).
penicilina/estreptomicina 100 mL (100 U/mL)	Fisher Científico	Números 15140-122
gas
100% Oxígeno	Airgas Inc	OX USP200
100% CO2	Airgas Inc	CD USPE
ratón
Ratones NOD/SCID de 6 a 8 semanas de edad (hembra)	Laboratorio Jackson	Año 1303
herramientas
Tubo cónico de 15 mL	Sarstedt	Año 11799
Placa de cultivo de tejidos de 150 mm	Ciencia de EE. UU. Inc	CC7682-3614
fórceps	Simetría Quirúrgica Inc	06-0011
Tijeras quirúrgicas	Simetría Quirúrgica Inc	02--2011
equipo
Incubadora humidificada al 5% deCO2	Termo Científico	3110
Máquina de imágenes bioluminiscentes (BLI)	Perkin Elmer	CLS136334
Software de la máquina de imágenes BLI	Perkin Elmer	CLS136335
Calibrador digital	Herramientas e instrumentos Fowler	54-115-330
Microscopio de disección	Instrumentos de precisión LLC	(504) 228-0076
Cámara de inducción de isoflurano	Perkin Elmer	119038