Modelado de xenoinjertos derivados de pacientes: una técnica para generar modelos de ratón de melanoma

Resumen

Fuente: Min Xiao et al. Un modelo de xenoinjerto derivado de un paciente con melanoma. J. Vis. Exp. (2018)

En este video, las células de melanoma derivadas de humanos se implantan subcutáneamente en la región del flanco de un ratón inmunodeprimido. El modelo PDX permite la investigación preclínica de células de melanoma que recapitulan mejor la heterogeneidad tumoral y la agresividad del melanoma observadas en condiciones in vivo.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Procesamiento de tejido tumoral para la implantación en ratones

1. Escisión quirúrgica o procesamiento de tejido de biopsia quirúrgica
   1. Transfiera el tejido a una placa de Petri estéril y separe el tejido tumoral del tejido normal circundante tanto como sea posible.
   2. Extirpar el tejido necrótico (generalmente identificado como tejido blanquecino pálido ubicado en el centro del tumor) del tumor restante tanto como sea ....

Resultados

Figura 1: Métodos alternativos de implantación.(A) Los tumores se pueden procesar en trozos, en una suspensión en suspensión o como una suspensión unicelular. (B) Los tres métodos permitirán el crecimiento de tumores in vivo. Aquí se muestran ratones a los que se les implantó el tumor por vía subcutánea y se les tomaron imágenes 12 días después de la implantación. (<.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
1 M Hepes	CORPORACIÓN SIGMA-ALDRICH	Cat # H0887-100ML
100x PenStrep	Invitrogen	Gato # 15140163
1x HBSS-/- (sin Ca++ o Mg++)	Med	Cat # MT21-023-CV
2.5% Tripsina	CORPORACIÓN SIGMA-ALDRICH	Cat # T4549-100ML	Alícuotas de 10 mL almacenadas a –20 °C
Bsa	CORPORACIÓN SIGMA-ALDRICH	Cat # A9418-500G
clorhexidina	Fisher Científico	Cat# 50-118-0313
Colagenasa IV (2.000 u/mL)	Worthington	Gato #4189	maquillaje en HBSS-/- a partir de polvo de colagenasa IV (Worthington #4189, u/mg indicado en el frasco y varía con cada lote); congelar 1
Dmso	CORPORACIÓN SIGMA-ALDRICH	Cat # C6295-50ML
DNasa	CORPORACIÓN SIGMA-ALDRICH	Cat # D4527
EGTA (etilenglicol bis(2-aminoethil éter)-N,N,N'N'-ácido tetraacético)	Merck	Cat # 324626.25
FBS	TECNOLOGÍAS INVITROGEN LIFE	Cat # 16000-044
Zona de hongos	TECNOLOGÍAS INVITROGEN LIFE	Cat # 15290-018
gentamicina	FISHER CIENTÍFICO	Gato # BW17518Z
Isoflurano	HENRY SCHEIN SALUD ANIMAL	Gato # 050031
Medios L15 de Leibovitz	Invitrogen	Gato # 21083027
Matrigel	Corning	Cat # 354230	Matriz extracelular artificial
Meloxicam	HENRY SCHEIN ANIMAL HEALTHRequisition # ::Henry Schein	Gato # 025115	1-5mg/kg, como analgésico
Ratones NOD/SCID/receptor nulo de IL2 (NSG)	The Wistar Institute, animalario		cría
PVA (alcohol polivinílico)	CORPORACIÓN SIGMA-ALDRICH	Cat # P8136-250G
RPMI 1640 Medio (Mod.) 1X con L-Glutamina	Fisher Científico	Gato# MT10041CM
escalpelo	pluma	Cat # 2976-22
Pinzas para heridas	Mikron	Gato #427631