HCR-DNA FISH: Una técnica de hibridación fluorescente in situ para detectar ADN viral en células infectadas

Resumen

Fuente: Wei Liu et al., Merkel Cell Polyomavirus Infection and Detection, J. Vis. Exp. (2019).

En este vídeo, las células infectadas con viriones MCPyV fueron sometidas a una reacción en cadena de hibridación in situ para detectar genomas específicos de MCPyV. Además, la técnica de ADN-HCR se combinó con FISH para visualizar el ADN MCPyV en células de piel humana infectadas.

Protocolo

1. Infección

1. Mantenga los fibroblastos dérmicos humanos primarios en DMEM con 10% de suero fetal de ternero, 1% de aminoácidos no esenciales y 1% de L-glutamina. Al llegar a la confluencia, divida los fibroblastos 1:4 sin girar hacia abajo.
   nota: Para obtener la máxima eficacia de la infección por MCPyV, utilice fibroblastos primarios entre los conductos 5 y 12 que se están dividiendo activamente en el momento de la siembra.
2. Para infectar fibroblastos dérmicos humanos, aspire el medio y lave las células con DPBS.
3. Añadir 1 mL de Tripsina-EDTA al 0,05% a la placa e incubar a 37 °C durante 5-10 min.....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tampón de hibridación de sonda	Tecnologías moleculares
Tampón de lavado de sonda	Tecnologías moleculares
Búfer de amplificación	Tecnologías moleculares
Horquillas etiquetadas con Alexa 594	Tecnologías moleculares	B4	Proteger de la luz
Paraformaldehído	Sigma	P6148