Visualización de la expresión de proteínas basada en CUBIC: un procedimiento para visualizar la expresión de proteínas en biopsias de piel de ratón de espesor completo

Abstract

Fuente: Liang, H. et al. protocolo CUBIC visualiza la expresión de proteínas a una resolución de una sola célula en preparaciones de piel de montaje completo. J. Vis. Exp (2016)

Este video describe la técnica de visualización basada en CUBIC, una técnica de imagen dependiente del aclaramiento de tejidos para la evaluación visual de la expresión de proteínas en biopsias de piel de montaje completo con resolución de una sola célula en 3D. Este protocolo técnicamente sencillo permite la visualización de las proteínas de la piel sin necesidad de preparar secciones de piel.

Protocol

Todos los procedimientos relacionados con animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Preparación del tejido transparente de la piel del ratón

NOTA: Todos los ratones utilizados en este estudio tenían un trasfondo genético C57BL/6

1. Recolección de tejido de piel de ratón.
   1. Sacrificar humanamente a los ratones por dislocación cervical.
   2. Retire con cuidado los pelos de la zona de la piel correspondiente con una recortadora, teniendo cuidado de no herir la piel.

Results

Figura 1: Preparación de la cámara de imagen. R: Los consumibles necesarios para la preparación de la cámara de imagen son tachuela azul, plastilina o similar, y 2 cubreobjetos (24 x 50 mm). B: Prepare dos tiras delgadas de tachuela azul (diámetro aproximado de 2 mm x 2 cm) y dos cubreobjetos. C: Coloque tiras de tachuelas azules en un cubreobjetos, dejando suficient.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Paraformaldehido	Sigma-Aldrich	P6418
Etanol 96% (sin desnaturalizar)	Suministro de productos químicos	UN1170
4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)	Roche	10236276001
N,N,N',N'-tetrakis (2-hidroxipropil) etilendiamina	Merck Millipore	821940
Éter de polietilenglicol mono-p-isooctilfenilo	Merck Millipore	648462
Tritón X-100	Merck Millipore	648462
sacarosa	Sigma-Aldrich	S0389
Temperatura óptima de corte (PTU) Compuesto	Tejido-Tek	4583
anti-Queratina14 anticuerpo	Covance	PRB-155P
anticuerpo anti-Ki67	Abcam	AB16667
Burro anti-conejo Alexa 594	Tecnologías de la Vida	A21207
Dimetilsulfóxido	Sigma-Aldrich	D2650
urea	Merck Millipore	66612
2,2′,2′'-nitrilotrietanol	Merck Millipore	137002
Microscopio confocal	Nikon Instruments Inc	Nikon A1 - Microscopio confocal
recortadora facial cruZer6	Braun	Cara Braun cruZer6
Azida de sodio	Sigma-Aldrich	438456