Ensayo de invasión de células tumorales: un método 3D in vitro basado en matrices nativas para evaluar las interacciones entre las células epiteliales y mesenquimales

Resumen

Fuente: Ng, Y. Z. et al. Ingeniería de tejidos del microambiente del estroma tumoral con aplicación a la invasión de células cancerosas. J. Vis. Exp. (2014)

Este video describe la técnica de utilizar una matriz nativa para estudiar la invasión de células tumorales. La técnica utilizada en este ensayo proporciona la capacidad de evaluar las interacciones entre células epiteliales y mesenquimales en un entorno 3D sin la necesidad de una matriz sintética o extraña.

Protocolo

1. Preparación de medios y reactivos

1. Preparación de 200x de caldo de ácido L-ascórbico 2-fosfato
   1. Disuelva 29 mg de ácido L-ascórbico 2-fosfato por 5 mL de solución de medio de águila modificado (DMEM) de Dulbecco y filtre a través de un filtro de membrana de 0,22 μm. Almacenar como alícuotas estériles de 0,25 mL a -20 °C.
   2. Añadir 0,25 mL de alícuota de 200x ácido L-ascórbico 2-fosfato por cada 50 mL de medio fibroblasto (DMEM con 1% de L-glutamina y 10% de suero fetal bovino) el día requerido, para una concentración final de 0,1 mM de ácido L-ascórbico 2-fosfato.
2. Preparación de medios de crecim....

Resultados

Figura 1. Flujo de trabajo de generación de matriz nativa derivada de fibroblastos y el ensayo de invasión tumoral.

....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Ácido L-ascórbico 2-fosfato	sigma	A8960
DMEM con L-glutamina, 4.500 mg/L de D-glucosa, 110 mg/L de piruvato de sodio	Tecnologías de la Vida	11995-073
100x Penicilina-Estreptomicina	Tecnologías de la Vida	Año 15070
vaselina	VWR	PROL28908.290
Cilindros clonales	sigma	Z370789
Disco filtrante de red de nailon hidrófilo 100 μm 25 μm diámetro 100/pk	Millipore	NY1H02500
Soporte de malla de alambre de acero inoxidable doblado	Hecho en casa		Las dimensiones se hicieron para que la malla encajara en placas de 6 pocillos