Ensayo de dosis mínima eritematosa: un método para medir la sensibilidad a los rayos UV en modelos de ratón

Resumen

Fuente: Amaro-Ortiz, A. et al. Inducción farmacológica de la melanina epidérmica y protección contra las quemaduras solares en un modelo de ratón humanizado. J. Vis. Exp. (2013)

Este video describe un método para medir la sensibilidad a los rayos UV en un modelo de ratón humanizado, un modelo de ratón que imita la piel humana. Determinamos la dosis eritematosa mínima (MED) de radiación UV que puede causar eritema o edema en la piel. El método puede ayudar a averiguar la eficacia de los fármacos utilizados para reducir la sensibilidad a los rayos UV.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

Determinación de la sensibilidad a los rayos UV mediante el cálculo de la "dosis eritematosa mínima" (MED)

1. Utilice animales que hayan sido tratados previamente con vehículo o forskolina. Anestesiar a los animales con inyección intraperitoneal de una mezcla estándar de ketamina y xilacina.
2. Prepare un pedazo de cinta adhesiva oclusiva UV para la prueba MED. Para generar agujeros en la cinta, utilice una perforadora de alta resistencia con un recorte circular de 1 cm² (Figuras 1A y B). Tener orificios de un tamaño definido y una disposición simétrica en la cinta facilita el reconocimiento de los cambios en la piel después de la irradiación. Sobre cada orificio de la cinta, aplique un trozo de cinta pequeño pero fácilmente desmontable que se pueda quitar en momentos definidos durante la exposición a los rayos UV para permitir la administración de diferentes dosis de rayos UV.
3. Una vez que los animales estén adecuadamente sedados, coloque la cinta en la superficie dorsal. El lubricante ocular siempre debe utilizarse bajo anestesia.
4. Encienda la fuente UV que consta de dos lámparas Westinghouse F15T8UV-B con una potencia máxima de 313 nm y un alcance de 280-370 nm. Permita que la lámpara se equilibre a una salida UV constante medida por un fotómetro UV con un sensor UVB (generalmente tarda unos minutos para que las lámparas se calienten).
5. En función de la tasa de transmisión UV medida por el fotómetro UV, calcule el tiempo de exposición UV para cada dosis deseada. Por ejemplo, la potencia UVB de nuestra lámpara mide 2,4 mW/^cm2. Por lo tanto, para administrar 5 kJ/m², la piel necesitaría estar expuesta a 208 seg (que son 3 min y 28 seg) de radiación UVB, como se calcula a continuación:
   
6. Coloque la superficie ventral de los animales sedados (cada uno con cinta oclusiva en su lugar) para garantizar una exposición uniforme a los rayos UV. Para administrar las dosis elegidas de radiación UV, retire secuencialmente las pequeñas cintas oclusivas que cubren los orificios para exponer áreas de 1^cm2 de piel a las dosis correctas de radiación. Por lo tanto, usando el ejemplo anterior, si 40 kJ/^m2 es la dosis más grande en el experimento, entonces el animal estaría bajo la lámpara durante 27 minutos y 47 segundos en total y la piel en la condición de 40 kJ/^m2 no tendría cinta superpuesta todo el tiempo. Sin embargo, la cinta que superpone la condición de 5 kJ/^m2 se retirará cuando queden 208 segundos en la exposición. El momento de la retirada de la cinta debe ser tal que cada condición termine simultáneamente.
7. Después de la exposición a los rayos UV, retire la cinta de la piel dorsal con cuidado, teniendo cuidado de no rasgar la piel con movimientos bruscos o demasiado fuertes. Coloque a los animales en un lugar cálido y tranquilo para permitir la recuperación de la anestesia.
8. Monitoree ratones durante 24-48 horas para buscar áreas discretas de eritema (enrojecimiento) o edema (hinchazón) correspondientes a los sitios anatómicos expuestos a la dosis específica de irradiación UV. Documentar fotográficamente los hallazgos de la piel.
9. El valor MED corresponde a la dosis mínima de UV que causa inflamación definida por eritema y/o edema de todo el círculo expuesto de la piel. Tenga en cuenta que la pigmentación de la piel puede dificultar la determinación de la MED, sin embargo, el eritema y el edema generalmente se pueden evaluar con precisión, gracias en parte a la forma definida de las aberturas en la cinta durante la exposición a los rayos UV.

Resultados

Figura 1. La melanización inducida por forskolina protege contra la inflamación mediada por los rayos UV, según lo determinado por las pruebas de dosis eritematosas mínimas (MED). (A,B) Posición de la cinta oclusiva UV y las dosis de UVB de los animales tratados dos veces al día durante 5 días (A,C) o una vez al día durante 15 días (B,D,E) con vehículo o forskolina. ...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Xilacina	Inyección anasada	LA04612	Shenandoah, Iowa, Estados Unidos
Ketamina HCl, USP	Putney	NDC 26637-411-01	St. Joseph, MO, Estados Unidos
etanol	Laboratorios de descontaminación.	Artículo 2705
Crema depilatoria, Nair	Iglesia Dwight	JF-11 4381322	Priceton, Nueva Jersey
Lámpara germicida de Hg UV-B	Westinghouse	F15T8UV-B
Fotómetro radiómetro	Luz internacional	1LT400A	Peabody, MA, Estados Unidos
Isothesia, Isoflurano, USP	Mayordomo Schein	NCD 11695-6776-1	Dublín, OH, Estados Unidos
Cromómetro	Konica Minolta	CR-400	Ramsey, Nueva Jersey, Estados Unidos
Procesador de datos para cromómetro CR-400	Konica Minolta	DR-400	Ramsey, Nueva Jersey, Estados Unidos