Imagen crónica de la corteza visual del ratón usando una preparación de Diluido-cráneo

Summary

En este material de vídeo y complementaria, se muestra un protocolo para la crónica In vivo Imágenes del cerebro intacto con una preparación diluida-cráneo.

Abstract

Imágenes in vivo utilizando dos fotones microscopía de barrido láser (2PLSM) permite el estudio de las células vivas y los procesos neuronales en el cerebro intacto. La técnica que aquí se presenta permite que la imagen de la misma área del cerebro en varios puntos del tiempo (crónica de imágenes) con resolución microscópica que permite el seguimiento de las espinas dendríticas, que son las pequeñas estructuras que representan la mayoría de los sitios postsinápticos excitatorios en el SNC. La capacidad de resolver bien claramente las estructuras corticales más de varios puntos del tiempo tiene muchas ventajas, especialmente en el estudio de la plasticidad del cerebro en la que los cambios morfológicos en las sinapsis y la remodelación del circuito puede ayudar a explicar los mecanismos subyacentes. En este material de vídeo y complementarias, se muestra un protocolo para la crónica en vivo de imágenes del cerebro intacto con una preparación diluida-cráneo. La preparación diluida-cráneo es un método mínimamente invasivo, lo que evita posibles daños a la duración y / o la corteza, lo que reduce la aparición de una respuesta inflamatoria. Cuando este protocolo se realiza correctamente, es posible seguir con claridad los cambios en las características de la espina dendrítica en el cerebro intacto durante un período prolongado de tiempo.

Protocol

1. Para visualizar las neuronas en el cerebro intacto utilizando microscopía de dos fotones, una preparación donde las neuronas son etiquetados con marcadores fluorescentes se utiliza. En los experimentos que aquí se presenta se utiliza la línea de las buenas prácticas agrarias-M de ratones transgénicos que las etiquetas de la capa de células piramidales 5 ^1. Capa 5 células piramidales proyecto prolongaciones dendríticas en las capas superficiales, lo que permite la visualización de las dendritas y espinas dendríticas hasta una profundidad de 300 m por debajo del nivel de la PIA. Un enfoque alternativo es a las células de la etiqueta utilizando los marcadores virales (véase ....

Discussion

Imágenes crónica utilizando microscopía de dos fotones se está convirtiendo en una técnica cada vez más popular para estudiar los cambios morfológicos se dispararon durante ^2-5 plasticidad. Aquí se demuestra una preparación diluida-cráneo de seguir identificado las espinas dendríticas en el cerebro del ratón intacto en día imágenes diferentes. En este protocolo, el cráneo se deja intacta, causando el mínimo daño a la corteza y que resulta en niveles muy bajos de la neuroinflamación que pueden alterar la funci.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
	de fentanilo	en casa		Cóctel de fentanilo: cóctel anestésico; IP Dosis: 0,0125 ml/g Cóctel final: 0,05 mg/kg
Clorhidrato de medetomindina Cóctel de		interno		: cóctel anestésico; IP Dosis: 0,0125 ml/g Cóctel final: 0,05 mg/kg
Midazolam HCL		Cóctel		: cóctel anestésico; IP Dosis: 0,0125 ml/g Cóctel final conc.: 0,05 mg/kg
2,2,2-tribrom– Cóctel de etanol				Avertin: Anestésico; IP Dosis: 0.0075 cc/ g Cóctel final: 1%
2-metil-2-butanol (Concentración final: 0.775%)				Cóctel de Avertina: Anestésico; IP Dosis: 0.0075 cc/ g Cóctel final conc.: .775%
TC-1000 Sistema de control de temperatura para ratones		CWE, Inc.	TC-1000 Regulación de	la temperatura corporal
del ratón Toberadex		Ungüento
doméstico 10% Cloruro férrico	Ricca Chemical Company	3120-32	Preparación de cráneo delgado
				Preparación de cráneo delgado
Cianoacrilato 401		Loctite	N/P 40140	Preparación de cráneo delgado
Zip Kicker Pegamento Acelerador Tecnología		Pacer	PT-29	Preparación de cráneo delgado
Micro Drill Fresas de acero de 0,7 mm de diámetro		Herramientas de ciencia fina	19008-07	Preparación de cráneo delgado
Caja de control de microtorque y pieza	de mano Tech2000	Productos Ram, Inc.	TECH2000ON/OFF	Preparación de cráneo fino
#6-0 (0.7 métrico) sutura de seda		Ethicon Inc.	K8894H	C-1
Pinza de apósito para ojos, 10 cm, ancho de punta de 0,5 mm, curvada	Herramientas quirúrgicas	Fine Science Tools	11152-10
Tijeras Bonn extrafinas, 8,5 cm, punta recta, filo de 13 mm	Herramientas quirúrgicas	Fine Science Tools	14084-08
Pinzas de patrón estándar, rectas, punta de 2,5 mm x 1,35 mm, 12 cm	Herramientas quirúrgicas	Fine Science Tools	11000-12