Este video se muestran los métodos para inducir transuretral infecciones del tracto urinario ratón y cuantificar la extensión de las infecciones resultantes.
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Artículo de método
Inducción transuretral de infección del tracto urinario ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
Cepas bacterianas uropatógena de interés se cultivan en agar. En general, los uropatógenos
Protocolo
I. Preparación de sondas uretrales
- Para cada uno de vejiga y los riñones del ratón para el muestreo, lugar 5-6 gotas de acero inoxidable (vejiga, el tamaño de 1,6 mm o de 0,9 a 2,0 mm mezcla) o granos de óxido de circonio (de los riñones, el tamaño de 0,5 mm) en un tubo de criovial, respectivamente. Autoclave de los tubos de cuentas que contienen.
- Después de los tubos de enfriar a temperatura ambiente, añadir 200 microlitros de PBS estéril a cada cordón de acero inoxidable que contiene el tubo y 400 microlitros de PBS estéril a cada grano de óxido de zirconio que contiene el tubo.
- Preparamos sondas uretrales según lo descrito por Hung y....
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Discusión
La inducción de la infección del tracto urinario del ratón mediante la inoculación de bacterias transuretral es un procedimiento de larga data, pero técnicamente exigente 11. Colgado y Hultgren ha publicado recientemente una excelente revisión de las técnicas transuretral de infección del tracto urinario del ratón 13. En este trabajo, se intenta ilustrar los puntos más importantes de este enfoque experimental.
Los principiantes pueden practicar su técnica mediante la re.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a Shelly Xie y Jennifer Payne por su asistencia técnica de expertos. Este trabajo fue posible gracias a donaciones de la Sociedad de Urología Pediátrica y el Fondo de Stanford Pediatric Research.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubos criogénicos, 2.0 ml de polipropileno (sin tapas) | E&K Scientific | 640201 | |
| Tapas para tubos criogénicos, con anillo ’O’ | E&K Scientific | 440011-N | |
| Mezclador tipo bala (Bullet Blender) | Next Advance | BBX24 | |
| Perlas de óxido de circonio (0,5 mm) | Next Advance | ZROB05 | |
| Perlas de acero inoxidable (1,6 mm) | Next Advance | SSB16 | |
| Mezcla de perlas de acero inoxidable (0,9-2,0 mm) | Next Advance | SSB14B | |
| Ratones CBA/J, hembras de 8-12 semanas de edad | Jackson Laboratory | 000656 | |
| Solución salina tamponada con fosfato (NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 4,3 mM, KH2PO4 1,4 mM) | EMD Millipore | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | |
| Agar LB | |||
| Caldo LB | EMD Millipore | 1.10285.0500 | |
| Isoflurano (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | NDC 10019-773-60 | |
| Asas de inoculación | Fisher Scientific | 22-363-601 | |
| Polvo de agar eosina-azul de metileno (EMB) | Himedia Laboratories | MM022-500G | |
| Polvo de agar MacConkey | Difco Laboratories | 212123 | |
| Polvo de agar LB | Difco Laboratories | 244520 | |
| Tubo de polietileno no radiopaco Intramedic, PE10 [dimensión interna 0,28 mm (0,011 pulgadas); dimensión externa 0,61 mm (0,024 pulgadas)] | BD Biosciences | 427401 | |
| Agujas de calibre 30, 1/2 pulgada | BD Biosciences | 305106 | |
| Jeringa tuberculina de 1 ml con punta deslizante (Slip-Tip) | BD Biosciences | 309602 | |
| Jeringa de 3 ml con sistema de bloqueo Luer-Lock | BD Biosciences | 309585 |
Referencias
- Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
- Rouschop, K. M. Urothelial C....
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Reimpresiones y permisos
