Focalización de estructuras profundas del cerebro con microinyecciones de entrega de medicamentos, vectores virales, o trasplantes de células

Resumen

En este artículo, se muestra un método para fabricar agujas capilar de vidrio con una luz de 50 micras. Esta técnica reduce significativamente el daño cerebral, minimiza la difusión pasiva de las drogas y permite una segmentación precisa en el cerebro de roedores.

Resumen

Microinyecciones en el parénquima cerebral son procedimientos importantes para llevar medicamentos, vectores virales o los trasplantes de células. La lesión cerebral que produce una aguja de la inyección durante su trayectoria es una gran preocupación especialmente en el cerebro del ratón, no sólo para el cerebro es pequeño, pero también a veces se necesitan múltiples inyecciones. Mostramos aquí un método para producir agujas capilar de vidrio con una luz de 50 m que reduce significativamente el daño cerebral y permite una segmentación precisa en el cerebro de roedores. Este método permite una entrega de volúmenes pequeños (20 a 100 nl), reduce los riesgos de sangrado y reduce al mínimo la difusión pasiva de drogas en el parénquima cerebral. Mediante el uso de diferentes tamaños de tubos capilares, o cambiar la luz de aguja, varios tipos de sustancias y las células se pueden inyectar. Microinyecciones con un tubo capilar de vidrio representan una mejora significativa en las técnicas de inyección y cerebral profunda orientación con mínimo daño colateral en los roedores pequeños.

Protocolo

1. Hacen que las agujas de vidrio antes de la cirugía del ratón:
   1. Coloque el tubo capilar de vidrio en un extractor de micropipeta.
   2. Calentar la mitad del tubo de vidrio para suavizar el tubo de vidrio en el área localizada.
   3. Estire el tubo de vidrio a lo largo de su eje longitudinal por una distancia inicial suficiente para causar una reducción en el diámetro del tubo de vidrio en el área localizada.
   4. Mantenga el estiramiento del tubo de vidrio hasta que se rompe. De esta manera, dos agujas idénticas barril se obtienen.
2. Coloque la aguja de vidrio en un microforge. Un ángulo de 30 ° es suficiente para bisel de la pun....

Discusión

El método demostró en este video es muy útil para proporcionar la mayor parte de los fármacos o vectores virales en lugares muy precisos en el cerebro. Algunas de las principales ventajas de esta técnica son la confiabilidad del punto de focalización, la exactitud de las inyecciones y el pequeño tamaño de la lesión cerebral y daños en las vías ^{1, 2, 5, 6.} Una vez que la técnica se estandarizó el rango de mala focalización que 50 micras o menos ^{1, 2.} Los trasplantes de células también puede hacerse .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo de vidrio capilar	Wiretrol I	5-000-1001
Extractor de micropipetas	Kopf Instruments Modelo	730
Microforge	World Precision Instruments, Inc.	Modelo 48000
Aceite mineral	MSDS	M7700
Grasa de alto vacío	Dow Corning	05054-AB
Anestesia: 2.5% Avertin			2,2,2-tribrom– Etanol + alcohol terc-amílico, 1:1 p/v
Almohadilla calefactora	Mastex	Modelo 900
Dispositivo estereotáctico	Kopf Instruments Modelo	Kopf-900
Hoja de bisturí quirúrgico # 15	Medi-Cut
Micro perforadora	Ideal Micro Drill	67-1000
Pinzas finas	Fine Science Tools
1-μ L Micropipeta	Rainin
Parafilm M.
Microscopio quirúrgico	Carl Zeiss, Inc.	Vasiorkop con sistema
Contraves Microinyector	Narishige International	Modelo MO-10