Entrega viral dirigida a neuronas corticoespinales en una rata neonatal para estudiar la lesión de la médula espinal

Resumen

Fuente: Smit, R. D., et al. Dirigirse al tracto corticoespinal en ratas neonatales con un vector viral doble mediante cirugía combinada de cerebro y columna vertebral. J. Vis. Exp. (2021)

Este video demuestra la administración dirigida de vectores virales a las neuronas corticoespinales en una rata neonatal. El protocolo permite una expresión génica precisa mediante inyecciones virales anterógradas y retrógradas, lo que facilita la investigación sobre la regeneración neural y la plasticidad después de una lesión de la médula espinal.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Inyecciones directas en la médula espinal dirigidas a terminales axonales

1. Con la punta de la aguja de inyección de vidrio, aproxime la línea media de la médula espinal identificando la arteria espinal. Sin embargo, si la arteria espinal está notablemente descentrada o se desvía de alguna manera, aproxime la línea media utilizando la posición de la apófisis espinosa C2 y extrapolando esto a lo largo de la columna vertebral.
   NOTA: Cargue el virus en el inyector pipeteando ~5 μL en un....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Flexible Needle Attachment	World Precision Instruments	MF34G-5	Para limpiar agujas de vidrio y cargar aceite rojo en agujas de vidrio.
Tubos capilares de vidrio	World Precision Instruments	4878	Para agujas de vidrio extraídas - debe estar diseñado para inyectores de nanolitros.
Micromanipulador con escala Vernier	Kanetec	N/A	Para una orientación precisa durante la cirugía.
Instrumento estereotáxico estándar de laboratorio	Stoelting	51600	Para mantener el soporte esterotáxico neonatal en su lugar
Lab Standard con adaptador de ratón y neonatos	51615	Para la fijación del cráneo neonatal durante la cirugía craneal y las inyecciones espinales
Microscopio con luz y escala Vernier Ocular	Leitz Wetzlar	N/A	Se utiliza para visualizar y medir el biselado de tubos capilares de vidrio extraídos en agujas de vidrio funcionales.
Controlador de bomba MicroSyringe	World Precision Instruments	62403	Para controlar la velocidad de inyección.
Inyector de cabeza de bomba Nanoliter 2000	World Precision Instruments	500150	Para cargar e inyectar virus de manera controlada.
pAAV-CMV-scCre	Wu lab		Cre plásmido
pAAV-hSyn-DIO-hM3Dq-mCherry (plásmido #44361)	Laboratorio de Bryan Roth a través	plásmido Addgene
PrecisionGlide Needles (25G x 5/8)	Becton, Dickinson and Company	305122	Para usar con las jeringas de 1 ml y 10 ml para permitir la inyección del modelo animal.
Pinzas de dientes de rata	Roboz	RS-5152	Para agarrar procesos espinosos.
Solución salina estéril	Baxter Healthcare Corporation	281324	Para uso en la limpieza de sangre y para reemplazar líquidos después de la cirugía.
Guantes quirúrgicos	N/A	N/A	Para uso del cirujano para mantener el campo estéril durante la cirugía.
Almohadilla térmica quirúrgica	N/A	N/A	Para mantener la temperatura corporal del modelo animal durante la cirugía.
Microscopio quirúrgico	N/A	N/A	Para una mejor visualización de la herida quirúrgica.

del DREADD