Enfoque estereotáxico de cisterna magna para la administración terapéutica en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Joshi, K., et al. Abordaje quirúrgico estereotáxico para microinyectar el tronco encefálico caudal y la médula espinal cervical superior a través de la cisterna magna en ratones. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra el enfoque estereotáxico de la cisterna magna para la administración dirigida al tronco encefálico y la médula espinal superior. Al acceder a la cisterna magna llena de líquido cefalorraquídeo, este enfoque permite inyecciones precisas en áreas que son difíciles de alcanzar utilizando métodos estereotáxicos estándar.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Apertura de la membrana cisternal

1. Use las pinzas Dumont en ángulo para agarrar la duramadre, que se extiende desde el hueso occipital hasta el atlas. Agarre la duramadre cerca del hueso occipital y use las tijeras de resorte para hacer una pequeña abertura (~ 0.5 a 1.5 mm) en la duramadre.
   NOTA: En esta ubicación rostral, el espacio entre el tronco encefálico y la duramadre suprayacente es más ancho, lo que proporciona un amplio espacio para la manipulación segura de la duramadre.
2. Use las tijeras de resorte para levantar la duramadre y abrirla más. El tamaño de la ventana depende del objetivo.
   NOTA: Se necesitará una ventana más grande cuando se realicen múltiples inyecciones longitudinales o inyecciones bilaterales; Una pequeña ventana será suficiente cuando se realicen inyecciones unilaterales únicas o en la línea media.
3. Una vez abierta la duramadre, drene el exceso de líquido cefalorraquídeo con una punta de taco estéril.

2. Identificación de puntos de referencia y punto cero

1. Vea la superficie dorsal del tronco encefálico con puntos de referencia detallados a través de la duramadre abierta. El óblast, el punto donde el canal central se abre hacia el ventrículo IV, es el punto cero anteroposterior y mediolateral estándar.

3. Inyección del objetivo

1. Baje la pipeta o jeringa al objetivo utilizando el brazo estereotáxico e inyecte la solución como para los enfoques estereotáxicos estándar. Dejar actuar durante 1-5 min después de la inyección para evitar una huella de aguja cuando se utilizan volúmenes entre 3-50 nL. Luego, levante la pipeta o jeringa con el brazo estereotáxico.
2. Repita el paso 3.1. para varios objetivos.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Pinzas angulares, Dumont 5/45	FST	11251-35	Solo para agarrar duratijeras
de resorte, Vannas 2.5mm con caja adjunta	FST	15002-08	Tijeras solo para abrir dura, caja para elevar el cuerpo
Micromanipulador estereotáctico	Kopf	1760-61	Conectado al soporte del electrodo para ajustar la posición en función de las coordenadas
Conjunto de marco en 'U' estereotáctico y placa base intracelular	Kopf	1730-B, 1711	Marco para cirugía
Aplicadores estériles con punta de algodón	Puritan	25-806 10WC	Absorción de sangre del campo quirúrgico