Administración sostenida del factor de crecimiento nervioso mediante una película de silicio poroso en células de feocromocitoma de rata 12

Resumen

Fuente: Rosenberg, M., et al. Diseño de películas de silicio porosas como portadoras del factor de crecimiento nervioso. J. Vis. Exp. (2019).

Este video demuestra el uso de una película de silicio poroso nanoestructurado (PSi) degradable para la liberación sostenida del factor de crecimiento nervioso (NGF) para apoyar la diferenciación celular PC12. El NGF se adsorbe en los poros de la película a través de interacciones electrostáticas y se libera gradualmente en los medios por difusión y degradación del andamio. Esta administración controlada promueve la supervivencia de las células PC12 y facilita el crecimiento y la ramificación de neuritas durante un período prolongado.

Protocolo

1. Fabricación de portadores de silicio poroso oxidado (PSiO₂)

1. Corte una oblea de silicio (Si) (un solo lado pulido en la cara de <100> y fuertemente dopado con boro, tipo p, 0,95 mΩ·cm) en muestras de 1,5 cm × 1,5 cm con un bolígrafo con punta de diamante.
2. Oxidar las muestras de Si en un horno tubular a 400 °C durante 2 h en aire ambiente (velocidad de calentamiento: 25 °C/min, enfriamiento natural).
3. Sumerja las muestras de Si en una solución de ácido fluorhídrico (HF) acuoso (48%), agua doblemente destilada (ddH₂O) y etanol (99,9%) (1:1:3 v/v/v) durante 5 min; luego enjuague las muestras con etanol tres veces y séquelas b....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Acetone	Gadot	830101375
Amphotericin	Biological Industries	03-028-1B
HF acuoso (48%)	Merck	101513
AZ4533 fotorresistente	Química de metales, Inc.	AZ4533
BSA fracción v	MP biomédica	216006950
solución BSA (10%)	Biological Industries	03-010-1B
Colágeno tipo l	Corning Inc.
Colagenasa	Enco	LS004176
Cubreobjetos de plástico recubiertos de colágeno	NUNC Thermanox	1059846
D-(+)-glucosa	Sigma-Aldrich Chemicals	G8170
Dispasa-II	Sigma-Aldrich Chemicals	4942078001
Absoluto de etanol (99,9%)	Merck	818760
FBS	Biological Industries	04-121-1A
Guanidina-HCl	Sigma-Aldrich Chemicals	G7294
Mezcla de nutrientes F-12 de Ham	Thermo Scientific	11765054
HBSS	Thermo Scientific	14185-045
HEPES (1M)	Thermo Scientific	15630-056
HS	Biological Industries	04-124-1A
L-15 medium	Sigma-Aldrich Chemicals	L5520
Laminin	Thermo Scientific	23017015
L-glutamina	Biological Industries	03-020-1A
Murine β-NGF	Peprotech	450-34-20
Burro normal suero (NDS)	Sigma-Aldrich Chemicals	G9023
Papaína	Sigma-Aldrich Chemicals	p-4762
PBS (pH 7,4)			Preparado disolviendo 10 mM de Na₂HPO₄, 1,8 mM de KH₂PO₄, 137 mM de NaCl y 2,7 mM de KCl en agua doblemente destilada (ddH₂O, 18 MΩ·cm).
PBS X10	Biological Industries	02-020-1A
Línea celular PC12	ATCC	CRL-1721
Penicilina-estreptomicina	Biological Industries	03-032-1B
Poli-L-lisina	Sigma-Aldrich Chemicals	P4832
Reactivo PrestoBlue	Thermo Scientific	A13261
RPMI medio	Biological Industries	01-100-1A Oblea
de Si	Siltronix Corp.		Altamente dopado con B, tipo p, resistividad de 0,00095 Ω cm, <100> orientado
Azida de sodio	Sigma-Aldrich Chemicals	S2002
Hidróxido de sodio (NaOH)	Sigma-Aldrich Chemicals	S8045
Ácido tánico	Sigma-Aldrich Chemicals	403040
Triton X-100	Chem-Impex International Inc.	AÑO 1279

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