Administración de fármacos oftálmicos para la neuromodulación no invasiva en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Zhan, J., et al. Estrategias no invasivas para la manipulación crónica de la actividad neuronal controlada por DREADD. J. Vis. Exp. (2019)

Este video demuestra un método de administración de fármacos oftálmicos no invasivo para la neuromodulación dirigida. El fármaco se administra a través de gotas para los ojos, se absorbe en la circulación, cruza la barrera hematoencefálica y activa receptores neuronales específicos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Administración repetitiva de N-óxido de clozapina (CNO) con gotas para

1. los ojos Aclimate a los animales al manejo desaliñando cada ratón 3 minutos al día durante 3-4 días antes de la administración de gotas para los ojos.
2. Disuelva el N-óxido de clozapina (CNO, 5 mg) en 1 ml de solución salina estéril al 0,9% (solución madre: 5 mg de CNO/ml). Mantener la solución refrigerada a 4°C.
3. Pese cada ratón antes de comenzar el experimento para determinar la cantidad de CNO que se administrará. Use una gota de 1-3 μL (por ojo) para lograr 1,0 mg de CNO/kg de peso corporal.
   NOTA: Por ejemplo, un ratón de 20 g debe recibir gotas oftálmicas bilaterales (2 μL cada una).
4. Administre las gotas para los ojos durante la fase inactiva (luz) de los ratones, 2 h antes de que se apaguen las luces (tiempo de zeitgeber (ZT) 10). En los casos en que el CNO deba administrarse durante la fase activa (oscura) de los ratones, asegúrese de que haya luz roja tenue para un manejo adecuado de los animales.
   NOTA: Se deben tomar precauciones para evitar interrumpir el ciclo circadiano (y de luz/oscuridad) de los animales de experimentación.
   1. Con una micropipeta P10, cargue la cantidad requerida (1-3 μL) de solución de CNO para lograr 1,0 mg de CNO/kg.
      NOTA: Utilice una punta de pipeta nueva y estéril para cada colirio. En este conjunto de experimentos, se realizaron gotas oftÖlmicas bilaterales de CNO; sin embargo, si se requiere una concentración de CNO más baja, también se pueden aplicar gotas para los ojos unilaterales.
   2. Inmovilizar al ratón a través del cogo.
   3. Expulse lentamente la solución hasta que se forme una gota estable en la punta de la pipeta.
   4. Acerque con cuidado la gota a la córnea del ojo del ratón hasta que se administre la solución. La punta de la pipeta nunca debe entrar en contacto con el ojo del ratón.
   5. Suelta el ratón y colócalo de nuevo en su jaula de origen.
5. Repita este procedimiento todos los días durante 5 días.
   NOTA: Esta duración se puede ajustar según los requisitos experimentales.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
BSA	Sigma life science	#A2153-100G	Polvo liofilizado ≥96% (electroforesis en gel de agarosa)
Ratones C57BL/6J	El laboratorio Jackson	#000664	ratones machos, 3 meses
de edad Capilares	Drummond Compañía científica	#3-000-203-G/X	Diámetro exterior: 1.14 in.
Clozapina-N-óxido Sigma		#C0832	5mg
Forane	Baxter	#NDC 10019-360-60	Isoflurano,
USP Microinyector III	Drummond Scientific Company	#3-000-207	Nanoject III - Inyector de nanolitros programable
Medios de montaje	Invitrogen	#P36930	Reactivo antidecoloración Prolong Gold