Visualización de vesículas extracelulares cianobacterianas mediante microscopía electrónica de transmisión

Abstract

Fuente: Biller, S. J., et al. Aislamiento y caracterización de vesículas extracelulares cianobacterianas. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra la preparación de vesículas extracelulares de cianobacterias para microscopía electrónica de transmisión mediante tinción negativa, lo que permite la visualización de alta resolución de la morfología, el tamaño y la pureza de las vesículas para análisis estructurales y comparativos.

Protocol

1. Caracterización de las vesículas aisladas

1. Realice microscopía electrónica de transmisión de tinción negativa (consulte la tabla de materiales) (TEM - microscopía electrónica de transmisión; tamaño de partícula, estructura, pureza).
   1. Para mejorar la calidad de la imagen, descargue incandescente la superficie de una rejilla TEM con recubrimiento anterior utilizando un sistema de descarga incandescente de acuerdo con las pautas del fabricante (consulte la Tabla de materiales).
   2. Aplique con cuidado ~ 5 μL de la muestra de vesícula y déjela reposar durante 5 min.
      >NOTA: Las muestras con concentraciones de vesículas >10^{9 mL-1} generalmente darán los mejores resultados; las muestras más diluidas tendrán pocas vesículas por imagen.
   3. Retire la muestra tocando el borde de una rejilla con un trozo de papel de filtro limpio.
   4. Pipetear una gota de 20-50 μL de acetato de uranilo al 2% (ver Tabla de Materiales) sobre una superficie plana cubierta por una película de plástico, y colocar la rejilla flotando encima de ella durante 2 min.
   5. Retire el acetato de uranilo con papel de filtro y flote brevemente sobre una gota de agua ultrapura para lavar. Repita el lavado con agua por segunda vez.
      NOTA: La cuadrícula seca final está lista para su visualización después del paso 1.1.5.

Materials