Crecimiento bacteriano y técnicas

Fuente: Cian, M. B. et. al., Separación de la envoltura celular de bacterias gramnegativas en fracciones de membrana interna y externa con ajustes técnicos para Acinetobacter baumannii. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la separación de las fracciones de membrana interna y externa de bacterias gramnegativas mediante ultracentrifugación en gradiente de sacarosa. Las fracciones de membrana se purifican y almacenan a bajas temperaturas para el análisis específico de componentes específicos...

Fuente: Mercier, N., et al. Purificación de afinidad MS2 junto con secuenciación de ARN en bacterias grampositivas. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra un procedimiento paso a paso para recolectar células bacterianas y lisarlas mecánicamente para liberar contenido intracelular.

Fuente: Mercier, N., et. al., Purificación de afinidad MS2 acoplada con secuenciación de ARN en bacterias grampositivas. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el aislamiento de ARN regulador pequeño (ARNs) marcado con MS2 unido a su ARN diana bacteriano mediante purificación por afinidad con una fusión de proteína de recubrimiento MS2 de proteína de unión a maltosa (MBP) inmovilizada en resina de amilosa.

Fuente: Feltwell, T., et.al. Separación de bacterias por cantidad de cápsulas utilizando un gradiente de densidad discontinuo. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra el uso de un gradiente de densidad discontinuo para separar cepas bacterianas según la cantidad de cápsulas. Al centrifugar una biblioteca mutante de transposones a través del gradiente, las bacterias con diferentes densidades de cápsulas se localizan en distintas capas. Las fracciones separadas se pueden recolectar para su...

Fuente: Gupta, S., Marcela Rodríguez, G. Aislamiento y caracterización de vesículas extracelulares producidas por micobacterias limitadas en hierro. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra el aislamiento escalonado de vesículas extracelulares (EV) de Mycobacterium tuberculosis cultivadas en condiciones limitantes de hierro que imitan el entorno del huésped. Describe el uso de la ultrafiltración, la centrifugación diferencial y la separación por gradiente de densidad para enriquecer e...

Fuente: Watson, D. C., et.al. Aislamiento y purificación escalables de vesículas extracelulares de Escherichia coli y otras bacterias. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el aislamiento y la concentración de vesículas extracelulares (EV) derivadas de la membrana externa de bacterias modificadas genéticamente. El proceso consiste en cultivar las bacterias para liberar vehículos eléctricos, seguido de pasos secuenciales de centrifugación y filtración para eliminar células y desechos.

Fuente: Watson, D. C., et al. Aislamiento y purificación escalables de vesículas extracelulares de Escherichia coli y otras bacterias. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el uso de la cromatografía de exclusión por tamaño con perlas de resina porosa para aislar vesículas extracelulares (EV) bacterianas de un filtrado de cultivo bacteriano. Los EV más grandes eluyen temprano al evitar los poros de la resina, mientras que las proteínas más pequeñas ingresan a los poros y se eluyen más tarde.

Fuente: Fattahi, N., et al. Interfaces de hidrogel fotodegradables para la detección, selección y aislamiento de bacterias. J. Vis. Exp. (2021).Este video demuestra la extracción de colonias bacterianas de un hidrogel fotodegradable utilizando luz ultravioleta. Se selecciona una colonia específica y se diseña una exposición a la luz con patrón para iniciar la degradación localizada del hidrogel. Después de ajustar la intensidad y la duración de la luz, se aplica la luz ultravioleta, liberando...

Fuente: Ghadigaonkar, D. y Rath, A. Aislamiento e identificación de bacterias resistentes a los antibióticos transmitidas por el agua y caracterización molecular de sus genes de resistencia a los antibióticos. J. Vis. Exp. (2023)Este video demuestra el aislamiento y la preparación de bacterias resistentes a los antibióticos a partir de una muestra de agua utilizando medios selectivos. El ADN se extrae de bacterias resistentes a los antibióticos y se amplifica para identificar los genes...

Fuente: Kazi, M. I., et. al., Generación de bibliotecas de inserción de transposones en bacterias gramnegativas para secuenciación de alto rendimiento. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la selección, cuantificación y preservación de bacterias receptoras Gram-negativas portadoras de inserciones de transposones basadas en la resistencia a la kanamicina.

Fuente: Fernández-Coll, L. y Cashel, M. Uso de radiomarcaje en placa de microtitulación para múltiples mediciones in vivo de Escherichia coli (p)ppGpp seguidas de cromatografía en capa fina. J. Vis. Exp. (2019)Este video presenta un protocolo de alto rendimiento para medir los niveles y la dinámica de los nucleótidos bacterianos de respuesta al estrés ppGpp y pppGpp mediante cromatografía en capa fina (TLC). El método proporciona un enfoque potente, rápido y rentable para cuantificar (p)ppGpp...

Fuente: Streather, B. R., et al. Producción y análisis optimizados de vesículas rellenas de proteínas recombinantes de E. coli. J. Vis. Exp. (2023)Este video demuestra la producción y el aislamiento de proteínas recombinantes marcadas con péptido nucleante de vesículas (VNp) a partir de vesículas bacterianas. Un inductor desencadena la expresión de proteínas marcadas con VNp, impulsando la formación y encapsulación de vesículas, seguidas de centrifugación y sonicación para una recuperación...

Fuente: Shivaiah, K., et al. Aislamiento de gotas de lípidos de plastoglóbulos del tejido foliar de la planta y cianobacterias. J. Vis. Exp. (2022).Este video demuestra el aislamiento de plastoglóbulos de cianobacterias mediante centrifugación en gradiente de densidad de sacarosa, destacando su naturaleza rica en lípidos y baja densidad y asegurando su preservación estructural para el análisis posterior.

Fuente: Armbruster, K. M., Meredith, T. C. Enriquecimiento de lipoproteínas bacterianas y preparación de lipopéptidos N-terminales para la determinación estructural por espectrometría de masas. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el enriquecimiento de lipoproteínas bacterianas utilizando un detergente no iónico que se somete a separación de fases al calentarse. A través de cambios secuenciales de temperatura y pasos de centrifugación, las lipoproteínas se dividen selectivamente en la fase...

Fuente: Leuthold, M. M., et al. Producción de dominios sobresalientes de norovirus humanos en E. coli para cristalografía de rayos X. J. Vis. Exp. (2016).Este video demuestra la purificación del dominio P del norovirus humano recombinante mediante cromatografía de exclusión por tamaño, destacando la separación de la proteína diana de las impurezas de mayor y menor peso molecular en función de la accesibilidad diferencial de los poros. El proceso se monitorea mediante absorbancia UV y se...

Fuente: Kuo, T., et al. Purificación cromatográfica negativa en un solo paso de la proteína activadora de neutrófilos de Helicobacter pylori sobreexpresada en Escherichia coli en modo por lotes. J. Vis. Exp. (2016)El video demuestra una técnica de cromatografía negativa para purificar una proteína asociada a la virulencia a partir de un lisado bacteriano. Mediante el uso de una resina cargada positivamente en una solución tamponada, las proteínas de la célula huésped se retienen selectivamente,...

Fuente: Murata, T., et al. Purificación de una proteína de alta masa molecular en Streptococcus mutans. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra un procedimiento paso a paso para la purificación de una proteína marcada con polihistidina secretada por Streptococcus mutans.

Fuente: Venuprasad, K., et al. Administración intratraqueal de Haemophilus influenzae en modelos de ratón para estudiar la inflamación de las vías respiratorias. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la recolección y el procesamiento del líquido de lavado broncoalveolar de un ratón sacrificado infectado con Haemophilus influenzae no tipificable para su análisis posterior.

Fuente: Ginies, C., et al. Identificación de ácidos grasos en Bacillus cereus. J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra el proceso de preparación de ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME) a partir de muestras bacterianas mediante el tratamiento de la biomasa con una solución alcalina, seguida de separación de fases y evaporación de solventes para el análisis posterior.

Fuente: Shivaiah, K., et al. Aislamiento de gotas de lípidos de plastoglóbulos del tejido foliar de la planta y cianobacterias. J. Vis. Exp. (2022)El video demuestra el aislamiento de plastoglóbulos de cianobacterias. Comienza con un cultivo de cianobacterias y continúa a través de la disrupción celular utilizando fuerza mecánica. La liberación de pigmentos fotosintéticos indica una lisis exitosa. Luego se usa un gradiente escalonado de sacarosa para separar los componentes celulares por...

Comience con cultivos de especies de Yersinia gramnegativas y enterobacterias no Yersinia.Usando inoculadores de aguja estériles, puntee los cultivos tanto en Cefsulodin-Irgasan-Novobiocin tradicional como en agar CIN y agar CIN modificado.Incube las placas para promover el crecimiento bacteriano.Tanto los agares CIN tradicionales como los modificados apoyan el crecimiento de Yersinia y Enterobacteriaceae no Yersinia que fermentan el manitol para producir subproductos ácidos.La producción de...

Comience con un cultivo de enriquecimiento derivado del suelo del humedal que contenga comunidades bacterianas.El cultivo exhibe actividad Feammox, oxidación de amonio acoplada a reducción de hierro férrico, lo que indica el enriquecimiento de una bacteria capaz de este proceso metabólico.Diluir en serie la cultura utilizando medios.Raye las muestras diluidas en placas de agar de prueba complementadas con hierro férrico y amonio.Use placas de control que carezcan de hierro férrico o amonio, o...

Fuente: Becker, B., et al. Un ensayo reportero simple basado en fluorescencia para identificar los componentes celulares necesarios para el tráfico de la cadena de la toxina A de la ricina (RTA) en levaduras. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demuestra la purificación de una proteína recombinante marcada con polihistidina mediante cromatografía de afinidad basada en níquel. Detalla pasos clave, incluyendo la lisis bacteriana por sonicación, la clarificación y filtración del lisato, y la unión...

Fuente: Wunderlin, T., et al. Aislamiento físico de endosporas de muestras ambientales mediante lisis dirigida de células vegetativas. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra un método para aislar endósporas de una muestra ambiental que contiene tanto células vegetales como diversas bacterias. El procedimiento implica filtración, alteración mecánica y tratamiento químico selectivo para debilitar y lisar células vegetales mientras se preservan las endósporas. El paso final aísla las endósporas...

Fuente: Gulla, S., et al. Análisis tándem-repetición multilocus de la bacteria patogénica de peces Yersinia ruckeri mediante PCR multiplex y electroforesis capilar. J. Vis. Exp. (2019).Este protocolo extrae ADN genómico de Yersinia ruckeri suspendiendo colonias aisladas en agua ultrapura y aplicando calor para lisar las células. La centrifugación separa el sobrenadante que contiene ADN de los restos celulares, produciendo ADN plantilla adecuado para la genotipificación basada en PCR y el...

Fuente: Gulla, S., et al. Análisis tándem-repetición multilocus de la bacteria patogénica de peces Yersinia ruckeri mediante PCR multiplex y electroforesis capilar. J. Vis. Exp. (2019).Este protocolo extrae ADN genómico de Yersinia ruckeri suspendiendo colonias aisladas en agua ultrapura y aplicando calor para lisar las células. La centrifugación separa el sobrenadante que contiene ADN de los restos celulares, produciendo ADN plantilla adecuado para la genotipificación basada en PCR y el...

Fuente: Stones, D. H., et al. Materiales biomiméticos para caracterizar las interacciones bacteria-huésped. J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra el uso de perlas bacteriomiméticas para cuantificar la adhesión bacteriana a las células epiteliales del huésped en condiciones competitivas. Describe los pasos involucrados en el tratamiento de las células, la lisis y la siembra de diluciones en serie para medir las unidades formadoras de colonias.

Fuente: Jung, A. L. et. al., Vesículas de membrana externa de Legionella pneumophila: aislamiento y análisis de su potencial proinflamatorio en macrófagos. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra el pretratamiento de macrófagos con vesículas de membrana externa (OMV) de Legionella pneumophila para examinar su efecto sobre la replicación bacteriana. Al alterar la señalización inmune del huésped, los OMV hacen que los macrófagos sean más permisivos a la infección. Los recuentos de colonias más...

Fuente: Jagau, H. et al. Infección por neumococo de células endoteliales humanas primarias en flujo constante. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra la visualización en tiempo real de la unión neumocócica a las cadenas del factor de von Willebrand (VWF) en células endoteliales en condiciones de flujo de medios constantes. Describe los pasos para estimular la liberación de VWF, etiquetar las cuerdas y cuantificar la unión bacteriana.

Fuente: Morrill, S. R., et al. Modelos de colonización vaginal murina por bacterias cultivadas anaeróbicamente. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra un protocolo para modelar la colonización vaginal en ratones utilizando bacterias anaeróbicas resistentes a los antibióticos. Comienza con un tratamiento hormonal para aumentar la susceptibilidad epitelial, seguido de la inoculación vaginal y la co-inoculación en condiciones anaeróbicas. El procedimiento concluye con un muestreo y cultivo...

Fuente: Li, J. et al. Desarrollo de un modelo de infección por larvas de pez cebra para Clostridioides difficile. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la administración basada en microinyección de Clostridioides difficile marcado con fluorescencia en la luz intestinal de una larva de pez cebra anestesiada. Describe los pasos involucrados en la preparación de larvas, la inyección bacteriana y la confirmación basada en microscopía de fluorescencia de la localización bacteriana dentro del...

Fuente: Cruz-Adalia, A., et al. Las células T capturan bacterias por transinfección de células dendríticas. J. Vis. Exp. (2016).Este video demuestra la transinfección bacteriana a través de interacciones entre células T específicas de antígeno y células dendríticas. Las células dendríticas infectadas por bacterias que presentan péptido de ovoalbúmina se incuban con células T, ya sea directamente o separadas por una membrana. El contacto directo permite la formación de sinapsis inmunológicas, lo...

Fuente: Balczon, R., et al. Métodos para detectar amiloides citotóxicos después de la infección de células endoteliales pulmonares por Pseudomonas aeruginosa. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el procedimiento para generar sobrenadante citotóxico a partir de células endoteliales pulmonares después de la infección por Pseudomonas aeruginosa. Describe cómo las proteínas efectoras bacterianas alteran la estructura de la célula huésped e inducen la liberación de oligómeros amiloides...

Fuente: Lee, H. et. al., Sistema de proteínas fluorescentes verdes divididas para visualizar efectores entregados por bacterias durante la infección. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra un método para monitorear la infección bacteriana y la administración de proteínas efectoras en células vegetales utilizando la complementación de proteína fluorescente verde de supercarpeta dividida (sfGFP) combinada con microscopía confocal. El enfoque permite una visualización precisa de la translocación...

Fuente: Islam, A., et al., Evaluación de la transcitosis intestinal de aislados neonatales de bacteriemia por Escherichia coli . J. Vis. Exp. (2023)Este video demuestra el procedimiento para evaluar la transcitosis de Escherichia coli neonatal a través de monocapas epiteliales intestinales utilizando insertos de transpocillos, medición de resistencia eléctrica y cuantificación bacteriana.

Fuente: Anderson, Q. L., et al. Un patosistema de C. elegans de alto rendimiento, alto contenido y base líquida. J. Vis. Exp. (2018)El video demuestra un ensayo a base de líquido donde las larvas de C. elegans modificadas genéticamente se exponen a bacterias patógenas en una microplaca. Las toxinas bacterianas secretadas en el medio inducen el estrés y la muerte del huésped. Un tinte fluorescente tiñe los gusanos muertos, lo que permite la cuantificación de la mortalidad basada en imágenes para...

Fuente: Yarringto, K. D., et al. Visualización cinética de interacciones bacterianas entre especies unicelulares. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra la preparación de un sistema de cocultivo utilizando bacterias móviles y no móviles debajo de una almohadilla de agarosa para imágenes de células vivas. Muestra cómo las bacterias móviles detectan atrayentes químicos e invaden colonias inmóviles, revelando interacciones bacterianas.

Fuente: Sorokulova, I., et al. Prevención de los efectos adversos del estrés por calor en ratas por la cepa Bacillus subtilis . J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra ratas pretratadas con bacterias beneficiosas o solución salina tamponada con fosfato (PBS) y expuestas al estrés por calor para evaluar la integridad de la barrera intestinal. Menos colonias bacterianas derivadas del intestino del hígado de las ratas tratadas, en contraste con numerosas colonias en ratas de control, indican una...

Fuente: Yi, Y., et al. Interacción Planta-Microbio: Respuesta Transcripcional de Bacillus Mycoides a los exudados de la raíz de la papa. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra la preparación y el tratamiento de cultivos de Bacillus mycoides para estudiar las interacciones planta-microbio. Describe los pasos desde rayar un cultivo de pasta e incubarlo en medio líquido hasta exponer las bacterias a los exudados de las raíces de las plantas bajo agitación. El proceso culmina con la recolección y...

Fuente: Venuprasad, K., et al. Administración intratraqueal de Haemophilus influenzae en modelos de ratón para estudiar la inflamación de las vías respiratorias. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la administración intratraqueal de un inóculo bacteriano patógeno pulmonar en un ratón anestesiado para modelar la infección del tracto respiratorio inferior.

Fuente: Taylor, M. N., et.al. Uso de datos de un solo gusano para cuantificar la heterogeneidad en las interacciones entre Caenorhabditis elegans y bacterias. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la exposición de gusanos Caenorhabditis elegans libres de gérmenes y de la misma edad a una cepa bacteriana para la colonización intestinal. Explica la eliminación selectiva de bacterias externas y no adheridas, dejando solo bacterias viables adheridas al epitelio intestinal para su cuantificación.

Fuente: Taylor, M. N. et al. Uso de datos de un solo gusano para cuantificar la heterogeneidad en las interacciones entre Caenorhabditis elegans y bacterias. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la cuantificación de la variabilidad de la carga bacteriana intestinal en Caenorhabditis elegans individuales a través de la interrupción mecánica. Describe los pasos para la preparación de muestras, la interrupción mecánica, la dilución en serie y el recuento de colonias para evaluar las diferencias...

Las bacterias endófitas colonizan los tejidos vegetales y promueven el crecimiento de las plantas.Para estudiar su impacto en el crecimiento de las plantas de tomate bajo estrés salino, comience con plántulas estériles que muestren hojas y raíces en desarrollo.Sumerja las raíces de la plántula experimental en una suspensión de bacterias endófitas; deje el control sin inocular.Transfiera ambos grupos a suelo esterilizado para evitar interferencias microbianas externas e incube en una cámara de...

Tome una mezcla de inóculo de bacterias solubilizadoras de fosfato o PSB y bacterias púrpuras sin azufre o PNSB.Rocíe la mezcla sobre el suelo mezclado con fertilizante y estiércol de vaca.Siembre la semilla y cúbrala con la tierra.Deja que la planta crezca.Las bacterias se localizan cerca de la raíz en una zona llamada rizosfera.PSB convierte los fosfatos insolubles del suelo en formas solubles.Mientras tanto, PNSB fija nitrógeno convirtiendo el gas nitrógeno atmosférico en amoníaco.La planta...

Comience con plántulas de arroz pregerminadas en condiciones oscuras y asépticas para garantizar una germinación uniforme.Transfiera estas plántulas a un matraz que contenga un medio semisólido rico en nutrientes preinoculado con una bacteria de prueba.A medida que la planta crece, las raíces liberan compuestos quimiotácticos en el medio circundante.Estos compuestos estimulan la proliferación bacteriana, lo que conduce a la adhesión, multiplicación y formación de colonias en la superficie de la...

Fuente:Ocean E. Clarke1, Romy A. Dop1, Tom Hasell1, Joanne L. Fothergill1, Daniel R. Neill21Universidad de Liverpool, 2 Universidad de DundeeEste video demuestra el uso de un dispositivo recubierto de silicona impreso en 3D que imita la superficie interna de los catéteres urinarios para simular la infección del tracto urinario asociada al catéter.

Fuente: Arroyo, M. C., et al. Evaluación de la viabilidad de un consorcio bacteriano sintético en la interfaz intestino-microbio in vitro . J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra la evaluación de la viabilidad de una comunidad microbiana oral sintética durante la digestión simulada oral, gástrica e intestinal. La supervivencia bacteriana se cuantifica tras cada fase, lo que revela un declive progresivo debido al estrés digestivo.

Fuente: Okamoto, A., et al. Instalación electroquímica autónoma para enriquecer bacterias que respiran ánodos in situ. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra el uso de un sistema electroquímico in situ para enriquecer bacterias que respiran ánodos (ARB) a partir de reservorios naturales. Se establece un gradiente redox colocando el ánodo en aguas profundas libres de oxígeno y el cátodo en aguas superficiales ricas en oxígeno. Los ARB forman biopelículas y transfieren electrones al ánodo, que...

Fuente: Ahmadi, S., et al. Un modelo de cultivo lotado in vitro para estimar los efectos de los regímenes intervencionistas sobre la microbiota fecal humana. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demuestra un método para modelar la fermentación microbiana intestinal incubando muestras de heces con fibra fermentable dietética bajo condiciones anaeróbias para estudiar la producción de metabolitos por microbiota intestinal.

Fuente: Biller, S. J., et al. Aislamiento y caracterización de vesículas extracelulares cianobacterianas. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la preparación de vesículas extracelulares de cianobacterias para microscopía electrónica de transmisión mediante tinción negativa, lo que permite la visualización de alta resolución de la morfología, el tamaño y la pureza de las vesículas para análisis estructurales y comparativos.

Fuente: Zhang, Y., et al. Aplicación de nanopartículas fluorescentes para estudiar la remodelación del sistema endolisosomal por bacterias intracelulares. J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra el uso de nanopartículas fluorescentes para visualizar la remodelación endo-lisosomal en células epiteliales humanas infectadas por bacterias intracelulares. Después de la invasión bacteriana, los patógenos manipulan el citoesqueleto del huésped y el sistema endolisosomal, formando vacuolas con...

Fuente: Valentine, M. E., et al. Generación de mutantes de deleción génica en el marco en Pseudomonas aeruginosa y pruebas de atenuación de virulencia en un modelo simple de infección en ratón. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra el uso de la bioluminiscencia para visualizar y comparar el comportamiento in vivo de cepas bacterianas virulentas y atenuadas en ratones. Describe la preparación de suspensiones bacterianas bioluminiscentes y su inyección intraperitoneal en ratones. La cepa...

Fuente: Guo, S., et al. Cuantificación de la motilidad del enjambre de la superficie bacteriana en placas de gradiente inductor. J. Vis. Exp. (2022).Este video demuestra el uso de una placa de enjambre de gradiente de doble capa para estudiar el comportamiento del enjambre bacteriano bajo concentraciones variables de inhibidores. Una placa con un inhibidor formador de gradiente en la capa inferior se inocula con bacterias y se incuba. Las imágenes se capturan a intervalos regulares para...

Fuente: Zhang, X., et al. Un modelo de embrión de pez cebra para la visualización in vivo y el análisis intravital de la infección por Staphylococcus aureus asociada a biomateriales. J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra imágenes de fluorescencia de embriones de pez cebra inyectados con Staphylococcus aureus, lo que permite cuantificar la progresión de la infección y la distribución bacteriana para evaluar el impacto de las microesferas de biomateriales en las interacciones huésped-patógeno in...

Fuente: Schlimpert, S. et al. Imágenes de lapso de tiempo de fluorescencia del ciclo de vida completo de S. venezuelae utilizando un dispositivo microfluídico. J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra imágenes de lapso de tiempo de fluorescencia del ciclo de vida completo de la bacteria Streptomyces venezuelae utilizando un dispositivo microfluídico para visualizar la germinación, el crecimiento de hifas y la esporulación en tiempo real.

Fuente: Bru, J., et.al. Imágenes de lapso de tiempo de enjambres bacterianos y la respuesta colectiva al estrés. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra cómo visualizar y medir el comportamiento de evitación de enjambres en Pseudomonas aeruginosa utilizando un ensayo de placa de agar de enjambre. Muestra la configuración para imágenes de lapso de tiempo en condiciones controladas y explica cómo las señales de estrés inducidas por antibióticos redirigen el movimiento bacteriano, que se...

Fuente: Heering, J., et al., Inducción de diferenciación celular e imágenes unicelulares de células nadadoras y enjambres de Vibrio parahaemolyticus . J. Vis. Exp. (2017).Este video demuestra la preparación de células de enjambre de una colonia de Vibrio parahaemolyticus para imágenes de fluorescencia. Las bacterias están diseñadas genéticamente para expresar una proteína marcada con fluoróforo que se localiza unipolarmente en las células nadadoras y bipolarmente en las células de enjambre...

Fuente: Bennett, J. A. et al. Evaluación visual y microscópica de mutantes del desarrollo de Streptomyces . J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el uso de la microscopía de contraste de fase para examinar las diferencias fenotípicas entre Streptomyces coelicolor de tipo salvaje y mutante. Describe los pasos involucrados en la preparación y obtención de imágenes de filamentos aéreos para detectar defectos de desarrollo en la formación de esporas.

Fuente: Chu, W. y Zhuang, X. Visualización de la motilidad bacteriana basada en una reacción de color. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra un ensayo de agar semisólido basado en colorantes redox para evaluar la motilidad bacteriana distinguiendo visualmente cepas móviles y no móviles.

Fuente: Pioli, R., et al., Patrón de microorganismos y micropartículas a través del ensamblaje secuencial asistido por capilaridad. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el método de capturar células individuales de Escherichia coli (E. coli) marcadas con fluorescencia en trampas microfluídicas utilizando una suspensión libre de carbono y un flujo controlado, seguido de la adición de nutrientes para desencadenar el crecimiento y las imágenes de fluorescencia de las microcolonias.

Fuente: Wen, J., Pasman, et. al., Visualización de germinosomas y la membrana interna en esporas de Bacillus subtilis . (2019)Este video demuestra el uso de microscopía de iluminación estructurada para adquirir imágenes de fluorescencia tridimensionales que revelan la organización de las proteínas de germinación dentro de la espora bacteriana.

Fuente: Oms, T., et al. Análisis poblacional y unicelular de la persistencia de antibióticos en Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2023)Este video presenta un protocolo para monitorear células bacterianas individuales que expresan una proteína de unión al ADN marcada con fluorescencia dentro de un sistema microfluídico. Ilustra cómo los antibióticos inhiben la mayoría de las células, mientras que una subpoblación de células persistentes sobrevive al tratamiento y vuelve a crecer después de la...

Fuente: Murata, K. et. al., Visualización de la compactación del ADN en cianobacterias mediante tomografía crioelectrónica de alto voltaje. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el cultivo sincrónico de cianobacterias bajo ciclos de luz-oscuridad para estudiar la compactación del ADN regulada por el circadiano. La microscopía de fluorescencia revela ADN condensado en puntos de tiempo definidos, lo que confirma la alineación del ciclo celular en toda la población.

Fuente: Chetrit, D., et al. Aplicación de imágenes de células vivas y tomografía crioelectrónica para resolver las características espaciotemporales del sistema de secreción de Legionella pneumophila Dot/ICM. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra el uso de imágenes de fluorescencia de células vivas para cuantificar la polaridad y la dinámica de los componentes del sistema de secreción en Legionella pneumophila, lo que permite el análisis del reclutamiento espacial y la redistribución...

Fuente: Chetrit, D., et al. Aplicación de imágenes de células vivas y tomografía crioelectrónica para resolver las características espaciotemporales del sistema de secreción de Legionella pneumophila Dot/ICM. J. Vis. Exp. (2020)El video describe cómo preparar muestras de Legionella pneumophila para tomografía crioelectrónica combinando cultivo bacteriano, marcado de nanopartículas de oro y técnicas de vitrificación. El proceso preserva las estructuras celulares nativas y permite obtener...

Fuente: Weber, N., et al., Transformación natural, expresión de proteínas y crioconservación de la cianobacteria filamentosa Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra el procedimiento para evaluar la motilidad de deslizamiento en la laguna de Phormidium homogeneizando los cultivos de filamentos para crear una suspensión uniforme, preparando una configuración de ensayo en placa de Petri sobre un portaobjetos de microscopio y visualizando el movimiento del filamento.

Fuente: Sorokulova, I., et al. Prevención de los efectos adversos por estrés térmico en ratas por la cepa Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo presenta análisis histológicos y de microscopía hematológica utilizados para evaluar los efectos protectores de Bacillus subtilis en ratas expuestas al estrés térmico.

Fuente: Chaimovitz, E. A., et al. Medición continua del ruido biológico en Escherichia coli usando microscopía de lapso de tiempo. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demuestra la visualización en tiempo real del ruido biológico en E. coli siguiendo las fluctuaciones en la fluorescencia de GFP durante el crecimiento y la división bacteriana mediante microscopía de lapso de tiempo.

Fuente: Fattahi, N., et al. Interfaces de hidrogel fotodegradables para la detección, selección y aislamiento de bacterias. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el uso de hidrogeles fotodegradables para aislar colonias bacterianas dentro de matrices de micropocillos de silicio. Las células bacterianas se cargan primero en micropocillos, se encapsulan en un hidrogel reticulado y se cultivan en colonias distintas. Tras la exposición a la luz ultravioleta, la degradación selectiva del hidrogel...

Fuente: Feltwell, T., et.al. Separación de bacterias por cantidad de cápsulas utilizando un gradiente de densidad discontinuo. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra la preparación y caracterización de cepas bacterianas con producción variable de cápsulas. Las cepas patógenas portadoras de diferentes mutaciones en genes relacionados con la cápsula se cultivan, se cultivan en medios líquidos y se someten a centrifugación para distinguir los fenotipos de la cápsula en función de la densidad de...

Fuente: Le Nagard, L., et al. Bacterias magnetotácticas en crecimiento del género Magnetospirillum: cepas MSR-1, AMB-1 y MS-1. J. Vis. Exp. (2018).Este video demuestra cómo cultivar bacterias Magnetospirillum en condiciones microaeróbicas utilizando medios líquidos y semisólidos. Destaca la formación de una banda bacteriana visible en la interfaz óxico-anóxica y su migración ascendente a medida que se agota el oxígeno. El video también muestra cómo evaluar el comportamiento magnetotáctico...

Fuente: Valentine, M. E., et al. Generación de mutantes de deleción génica en el marco en Pseudomonas aeruginosa y pruebas de atenuación de virulencia en un modelo simple de infección en ratón. J. Vis. Exp. (2020).Este video demuestra la generación de recombinantes de doble cruce en Pseudomonas aeruginosa utilizando una estrategia de deleción de genes basada en plásmidos. El proceso implica seleccionar bacterias que albergan un plásmido no replicativo integrado en el genoma a través de un solo...

Fuente: Schlimpert, S., et al. Imágenes de lapso de tiempo de fluorescencia del ciclo de vida completo de S. venezuelae utilizando un dispositivo microfluídico. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra el cultivo y aislamiento de esporas de Streptomyces venezuelae. Las esporas, células latentes que ayudan a las bacterias a sobrevivir al estrés, se producen durante la limitación de nutrientes y se recolectan mediante centrifugación. El método garantiza una suspensión de esporas pura y almacenada...

Fuente: Heering, J., et al. Inducción de diferenciación celular e imágenes unicelulares de células nadadoras y enjambres de Vibrio parahaemolyticus . J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la inducción de la diferenciación celular de enjambre en Vibrio parahaemolyticus utilizando un medio de agar especialmente preparado. Al manipular señales ambientales como el agotamiento del hierro, la suplementación con calcio y el contacto con la superficie, las bacterias son estimuladas para hacer la...

Fuente: Li, J., et. al., Desarrollo de un modelo de infección de larvas de pez cebra para Clostridioides difficile. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra el aislamiento y cultivo de la bacteria Clostridioides difficile del intestino de las larvas de pez cebra. El intestino infectado se disecciona, homogeneiza e incuba en medios anaeróbicos selectivos que contienen antibióticos. Estas condiciones suprimen los microbios competidores y promueven el crecimiento de células viables.

Fuente: Ayivi, R. et al., El cultivo, el crecimiento y la viabilidad de las bacterias del ácido láctico: una perspectiva de control de calidad. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra el método para recuperar bacterias de ácido láctico sometidas a estrés frío de un stock de glicerol congelado, restaurar la viabilidad bacteriana a través de la incubación anaeróbica y aislar colonias activas para la expansión del cultivo.

Fuente: Kuo, C., et al. Detección de colonización enterohemorrágica por Escherichia coli en huésped murino mediante un sistema de bioluminiscencia in vivo no invasivo. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra la preparación de una suspensión de Escherichia coli enterohemorrágica que expresa luciferasa a partir de caldo congelado para su uso como inóculo oral en modelos animales. Esto permite el seguimiento bioluminiscente en tiempo real de la colonización intestinal durante los estudios de...

Fuente: Nathoo, N., et al. Un sistema de cocultivo hidropónico para el análisis simultáneo y sistemático de las interacciones moleculares y la señalización de plantas / microbios. J. Vis. Exp. (2017).Este video demuestra un sistema de cocultivo hidropónico para estudiar las interacciones planta-bacteria en condiciones estériles. Las plántulas de plantas se transfieren a un medio de crecimiento estéril y ácido, se incuban y se inspeccionan para detectar contaminación antes de la inoculación con...

Fuente: Figueroa, D. M., et al. Producción y visualización de esferoplastos y protoplastos bacterianos para caracterizar la localización de péptidos antimicrobianos. J. Vis. Exp. (2018)Este video muestra un procedimiento paso a paso para generar protoplastos a partir de la bacteria grampositiva Bacillus megaterium.

Fuente: Eggers, C. H. Manipulación genética mediada por fagos de la espiroqueta de la enfermedad de Lyme Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la preparación de un cultivo de Borrelia burgdorferi modificado genéticamente diseñado con ADN de bacteriófago latente que porta un gen de resistencia a los antibióticos. Después de la selección e incubación de antibióticos, un inductor químico desencadena daños en el ADN, lo que lleva a la escisión, replicación y ensamblaje de...

Fuente: Morales-Soto, N. et. al., Preparación, obtención de imágenes y cuantificación de ensayos de motilidad de la superficie bacteriana. J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra un ensayo de enjambre utilizando bacterias que expresan proteína verde fluorescente para observar la motilidad de la superficie en agar blando. Las imágenes de lapso de tiempo capturan la expansión coordinada y la formación de zarcillos, destacando la motilidad de la superficie bacteriana.

Fuente: Anwar, Z., et al. Enriquecimiento y detección de toxinotipos de Clostridium perfringens en muestras de alimentos al por menor. J. Vis. Exp. (2019).En este video, las bacterias reductoras de sulfito se cultivan en un medio de agar que contiene sulfito, donde crecen anaeróbicamente y reducen el sulfito a sulfuro de hidrógeno, formando precipitados negros con iones de hierro. Las colonias negras se aíslan de la profundidad del agar utilizando técnicas asépticas y se transfieren a un medio...

Fuente: Morita, M., et al. Cultivo de células bacterianas a nivel unicelular dentro de vesículas gigantes. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra un método para cultivar y observar células bacterianas individuales encapsuladas dentro de vesículas gigantes ancladas a una bicapa lipídica soportada. El sistema permite obtener imágenes estables y a largo plazo de la dinámica de crecimiento de una sola célula en un microambiente confinado y fisiológicamente relevante.

Fuente: Tomás, J. M., et al. Generación de mutantes nulos para dilucidar el papel de las glicosiltransferasas bacterianas en la motilidad bacteriana. J. Vis. Exp. (2022).Este video demuestra la amplificación dependiente del iniciador de un plásmido suicida en E. coli. El plásmido, que porta un gen de resistencia a los antibióticos, se replica solo en presencia de una proteína iniciadora codificada por el huésped. Después de la electroporación e incubación en medio de recuperación, la mezcla se...

Fuente: Cafini, F., et.al. Metodología para el estudio de la transferencia horizontal de genes en Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la absorción de ADN inducida por la competencia en Staphylococcus aureus a través de la transformación natural. Una cepa sensible al cloranfenicol diseñada para expresar constitutivamente un factor sigma se cultiva en condiciones limitantes de nutrientes para mejorar la competencia, luego se incuba con ADN de donante que lleva un gen de...

Fuente: Anderson, Q. L., et al., Un patosistema de C. elegans de alto rendimiento, alto contenido y base líquida. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra la preparación de bacterias de interferencia de ARN (ARNi) que transportan plásmidos para inhibir la expresión génica diana. Describe los pasos de selección, crecimiento e inducción de bacterias de ARNi para producir placas que expresan dsRNA para ensayos posteriores.

Fuente: Brodl, E., et al. In situ Medición y correlación de la densidad celular y la emisión de luz de bacterias bioluminiscentes. J. Vis. Exp. 1 (2018)Este video demuestra el cultivo de bacterias bioluminiscentes marinas para observar la activación mediada por detección de quórum del operón de luminiscencia, lo que permite el monitoreo en tiempo real de la expresión génica y la emisión de luz para estudios de comunicación microbiana y regulación génica.

Fuente: Gilmore, S. F., et al. Producción a escala libre de células y adición adyuvante a una proteína principal de membrana externa recombinante de Chlamydia muridarum para el desarrollo de vacunas. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra la síntesis libre de células de antígenos de proteínas de membrana estabilizados con nanodiscos utilizando un sistema de doble compartimento. El dispositivo mantiene las condiciones óptimas para una síntesis eficiente de proteínas, un plegamiento adecuado y...

Fuente: Bru, J., et al., Imágenes de lapso de tiempo de enjambres bacterianos y la respuesta colectiva al estrés. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra el procedimiento para analizar el comportamiento de enjambre de Pseudomonas aeruginosa mediante la observación del crecimiento bacteriano desde un cultivo central hacia puntos satélite que contienen el mismo cultivo mezclado con un antibiótico, utilizando una configuración de placa de agar e imágenes de lapso de tiempo.

Fuente: Liu, P. C., et al. Diseño y uso de un morbidostat automatizado de bajo costo para la evolución adaptativa de bacterias bajo selección de antibióticos. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra el uso de un chip microfluídico para visualizar y comparar el crecimiento y la morfología de cepas de E. coli de tipo salvaje y resistentes a trimetoprima bajo estrés antibiótico trimetoprima.

Fuente: Bhaduri, S., et al., Precipitación de calcita inducida microbiológicamente mediada por Sporosarcina pasteurii. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra el método de enriquecimiento de Sporosarcina pasteurii con urea y cloruro de calcio para desencadenar la actividad de la ureasa, lo que lleva a la formación de cristales de calcita visibles a través de la precipitación de calcita inducida microbiológicamente o MICP.

Fuente: Figueroa, D. M., et.al. Producción y visualización de esferoplastos y protoplastos bacterianos para caracterizar la localización de péptidos antimicrobianos. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra la producción de esferoplastos de Escherichia coli inhibiendo primero la división celular para inducir la filamentación, seguida de la digestión enzimática de la pared celular. El proceso incluye la adición controlada de un agente quelante, DNasa y un estabilizador osmótico para garantizar la...

Fuente: Collins, A. J., et al., Establecimiento de cultivos binarios estables de sacaribacterias simbióticas de la cavidad oral. J. Vis. Exp. (2021)Este video demuestra el establecimiento y mantenimiento de un cultivo binario de Saccharibacteria y su bacteria huésped mediante la coincubación secuencial en un medio de crecimiento específico del huésped.

Fuente: Erdogan, F., et al., Ensayos de apareamiento conjugativo para el análisis específico de secuencias de proteínas de transferencia involucradas en la conjugación bacteriana. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra el procedimiento para transferir un plásmido F de células de E. coli del donante al receptor utilizando un plásmido de rescate y seleccionando transconjugantes a través de una doble resistencia a los antibióticos. El proceso incluye la mezcla de cultivos bacterianos, la...

Fuente: Cheng, C., et al. Inactivación de patógenos mediante fotólisis con luz visible de riboflavina-5′-fosfato. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra un método para evaluar los efectos fototóxicos del mononucleótido de flavina (FMN) en bacterias patógenas. Los cultivos bacterianos se exponen a concentraciones crecientes de FMN y se iluminan con luz visible para generar especies reactivas de oxígeno (ROS) que dañan los componentes celulares. Luego, las bacterias sobrevivientes se cuantifican...

Fuente: Gupta, S., et al. Aislamiento y caracterización de vesículas extracelulares producidas por micobacterias limitadas en hierro. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra el procedimiento para cultivar Mycobacterium tuberculosis en condiciones limitadas de hierro para inducir estrés ferropérico y promover la secreción de sideróforos que apoyan la supervivencia bacteriana.

Fuente: Niu, L., et al., Visualización de la muerte de células líticas de macrófagos durante la infección por micobacterias en embriones de pez cebra mediante microscopía intravital. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra la preparación de una suspensión unicelular de Mycobacterium marinum a partir de un cultivo de fase logarítmica tardía para un uso consistente en ensayos de infección y aplicaciones posteriores.

Fuente: Paschke, P., et al. Ingeniería genética de células de Dictyostelium discoideum basada en la selección y el crecimiento de bacterias. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra el procedimiento para introducir un plásmido que lleva un gen diana en las células de la ameba mediante electroporación, seguido de la recuperación en un suplemento bacteriano para permitir la administración eficiente de genes en amebas de tipo salvaje.

Fuente: Gutiérrez, S., et. al., Aislamiento de fagosomas que contienen Salmonella typhimurium de macrófagos. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra el cultivo y la preparación de Salmonella typhimurium para obtener una suspensión bacteriana limpia y metabólicamente activa adecuada para uso experimental.

Fuente: Lin, P., et al. Sintetización de microcápsulas de tungstato de sodio y molibdato de sodio mediante excreción mineral bacteriana. J. Vis. Exp. (2018).Este video demuestra la preparación de un cultivo bacteriano monoclonal para la producción de minerales a través de la dilución en serie y el aislamiento de colonias en una placa de agar. Al agitar la placa con perlas de vidrio, las células individuales se separan espacialmente para formar colonias genéticamente uniformes, que luego se...

Fuente: Lin, P., et al. Sintetización de microcápsulas de tungstato de sodio y molibdato de sodio mediante excreción mineral bacteriana. J. Vis. Exp. (2018).Este vídeo demuestra el procedimiento para sintetizar microcápsulas rígidas de óxido metálico mediante el cultivo de bacterias reductoras de metales con iones metálicos, seguido de una purificación secuencial mediante sonicación, centrifugación y lavado con etanol.

Fuente: Fuchs, F. M., et al. Investigación de los efectos perjudiciales de la esterilización con plasma a baja presión en la supervivencia de las esporas de Bacillus subtilis mediante microscopía de células vivas. J. Vis. Exp. (2017)Este video demuestra la producción, purificación y deposición a base de aerosoles de esporas de Bacillus subtilis para crear una monocapa uniforme, lo que permite aplicaciones posteriores como el análisis basado en microscopía de la germinación de esporas, la...

Fuente: Vieira, J., et al. Diseño y desarrollo de un modelo para estudiar el efecto del oxígeno suplementario en el microbioma de las vías respiratorias de la fibrosis quística. J. Vis. Exp. (2021).Este video demuestra la preparación de un medio de esputo artificial que imita la viscosidad, la composición de nutrientes y el pH del esputo pulmonar de fibrosis quística. El medio resultante proporciona una plataforma fisiológicamente relevante para estudios ex vivo.

Fuente: Maurakis, S. y Cornelissen, C. N. Crecimiento limitado por metales de Neisseria gonorrhoeae para la caracterización de genes sensibles a metales y adquisición de metales de ligandos huéspedes. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra el procedimiento para cultivar Neisseria gonorrhoeae en condiciones limitadas de metales utilizando un medio definido y sin metales.

Fuente: Naji, A., et al. Estudio del estrés oxidativo causado por los estreptococos del grupo Mitis en Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra el método para cultivar Streptococcus mitis en condiciones microaerofílicas utilizando extracto de levadura Todd-Hewitt, o medio de agar THY, para preparar cultivos bacterianos para estudios de interacción huésped-patógeno.

Fuente: Venuprasad, K. et. al., Administración intratraqueal de Haemophilus influenzae en modelos de ratón para estudiar la inflamación de las vías respiratorias. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra el cultivo de Haemophilus influenzae no tipificable y la preparación de un inóculo estandarizado por dosis para estudios posteriores de colonización o infección.

Fuente: Stefan, A., et al., Los beneficios multifacéticos de la coexpresión de proteínas en Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2015)Este video demuestra el procedimiento para transformar Escherichia coli con un plásmido portador de un gen de resistencia a los antibióticos, incluida la preparación celular, la electroporación, la recuperación y la selección de transformadores.

Fuente: Jiang, H., Ho, M. Aislamiento y caracterización de ficobilisomas intactos en cianobacterias. J. Vis. Exp.(2021).Este video demuestra el procedimiento para cultivar cianobacterias para obtener biomasa mediante el cultivo de células bajo iluminación continua con suministro de dióxido de carbono y condiciones ricas en nutrientes, seguido de la recolección mediante centrifugación.

Fuente: Wiegand, D. J., Lee, et al., Expresión de proteínas libres de células utilizando la bacteria de rápido crecimiento Vibrio natriegens. J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra el cultivo y la cosecha de Vibrio natriegens, una bacteria de rápido crecimiento, en condiciones aireadas para preparar gránulos bacterianos para la generación de extracto crudo.

Fuente: Wiegand, D. J., et al. Expresión de proteínas libres de células utilizando la bacteria de rápido crecimiento Vibrio natriegens. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra la preparación de un extracto celular de Vibrio natriegens, una bacteria de rápido crecimiento conocida por su alta tasa de síntesis de proteínas. El gránulo bacteriano se lava y se vuelve a suspender en tampón de lisis antes de la sonicación en hielo para evitar la degradación celular. El lisado se centrifuga para...

Fuente: Wiegand, D. J., et al. Expresión de proteínas libres de células utilizando la bacteria de rápido crecimiento Vibrio natriegens. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra el uso de un sistema de expresión de proteínas libres de células bacterianas basado en lisado crudo de Vibrio natriegens para realizar transcripción y traducción in vitro acopladas. Destaca la preparación de una mezcla maestra con componentes esenciales y la síntesis paso a paso de proteínas funcionales a partir de una...

Fuente: Jian, X., et al., Cultivo microbiano automatizado y evolución adaptativa mediante el sistema de cultivo de microgotas microbianas (MMC). J. Vis. Exp. (2022).Este video demuestra el uso de un sistema de cultivo de microgotas microbianas para impulsar la evolución adaptativa de las bacterias hacia la tolerancia al metanol. Al mezclar cultivos bacterianos diseñados con un medio de alto estrés de metanol y segmentarlos en microgotas, el sistema selecciona mutantes que exhiben un crecimiento...

Fuente: Weber, N., et al., Transformación natural, expresión de proteínas y crioconservación de la cianobacteria filamentosa Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)Este video describe un procedimiento para realizar una transformación natural en cianobacterias filamentosas utilizando ADN plasmídico para lograr una expresión estable de GFP y resistencia a los antibióticos a través de la recombinación homóloga.

Fuente: Wagner, A. O., et al., Preparación media para el cultivo de microorganismos en condiciones estrictamente anaeróbicas/anóxicas. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra la preparación e inoculación de cultivos anaeróbicos utilizando lodos libres de oxígeno en condiciones estrictamente controladas y desoxigenadas.

Fuente: Lea-Smith, D. J., et al. Generación de mutantes marcados y sin marcadores en especies de cianobacterias modelo. J. Vis. Exp. (2016)El video demuestra un método para generar mutantes marcados con antibióticos en cianobacterias. El protocolo comienza con el cultivo de cianobacterias, seguido de pasos de centrifugación y lavado que preservan la superficie pili. Luego se introduce un plásmido portador de un gen de resistencia a los antibióticos flanqueado por secuencias homólogas. Durante...

Comience con un digestor anaeróbico, un reactor sellado y libre de oxígeno sembrado con un lodo sintético que imita los sólidos sedimentados de las aguas residuales.El lodo contiene microbios anaeróbicos mesófilos, una comunidad microbiana mixta.Estos microbios prosperan a temperaturas moderadas e impulsan la digestión de la materia orgánica del lodo.Mezcle continuamente el lodo para mantener la actividad bacteriana y promover la digestión.Más tarde, agregue bioplásticos, que son polímeros...

Comience con un turbidostato, un dispositivo que mantiene una densidad celular constante en cultivo.El dispositivo contiene un recipiente con un cultivo bacteriano, que se airea continuamente agitando y se mantiene a una temperatura constante.Un diodo láser emite un haz de luz que se divide en dos caminos.Un camino se dirige a un sensor de referencia para monitorear las fluctuaciones de intensidad del láser, mientras que el otro pasa a través del cultivo.Las células bacterianas dispersan y...

Comience con una cepa de bacterias Pseudomonas aeruginosa , aislada de suelo contaminado con aceite, en un medio que contenga una fuente de nitrógeno y un exceso de aceite comestible como fuente de carbono.Esta cepa sintetiza polihidroxialcanoato (PHA), un polímero de cadena larga útil en la producción de bioplásticos.Incubar bajo agitación para facilitar la aireación y promover el crecimiento bacteriano.Inicialmente, el medio suministra fuentes de carbono y nitrógeno para apoyar la...

Comience con un cultivo de Alishewanella, una bacteria gramnegativa tolerante a la sal.A continuación, raye el cultivo en placas de agar que contengan concentraciones crecientes de cloruro de sodio para simular niveles variables de estrés salino.Cubra cada placa con una capa de medio no solidificado para evitar la difusión de oxígeno y mantener el cultivo en un ambiente con oxígeno limitado.Selle e incube las placas a una temperatura óptima para apoyar el crecimiento bacteriano.Durante la...

Fuente: Arias, S. L., et al. Fabricación de una nanocelulosa bacteriana magnética funcionalizada con nanopartículas de óxido de hierro. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demuestra la producción de nanocelulosa mediante el cultivo de bacterias productoras de celulosa en un medio nutritivo que contiene manitol. Las bacterias metabolizan el manitol en glucosa, que luego se polimeriza y extruye como cadenas de glucano que cristalizan en láminas de celulosa, formando una matriz tridimensional en la...

Fuente: Brumfield, K. D. et al., Técnicas de laboratorio utilizadas para mantener y diferenciar biotipos de aislados clínicos y ambientales de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo muestra el crecimiento de cultivos bacterianos en un medio líquido. El agitado favorece la aireación y distribuye los nutrientes de manera uniforme, apoyando un crecimiento exponencial y resultando en una suspensión uniforme y metabólicamente activa, adecuada para aplicaciones aguas abajo.

Fuente: Schumacher, D., et al. Imagen de células vivas por fluorescencia del ciclo celular vegetativo completo de la bacteria social de crecimiento lento Myxococcus xanthus. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo muestra la preparación e imagen de Myxococcus xanthus, una bacteria del suelo de crecimiento lento. El cultivo se cultiva en un medio medio, se aplica sobre una capa con microesferas fluorescentes y se recubre con una almohadilla de agarosa precalentada para apoyar la hidratación y el...

Fuente: Yang, Z., et al. Una plataforma de alto rendimiento para el cribado de especies de Salmonella /Shigella spp.. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demuestra el enriquecimiento selectivo e identificación de Salmonella utilizando xilosa lisina desoxicolato (XLD) y agar cromogénico. El caldo de selenito favorece el crecimiento de Salmonella , mientras que el agar XLD revela colonias de centro negro mediante la producción de sulfuro de hidrógeno. El agar cromogénico confirma la identidad mediante...

Fuente: Jeong, H., et al. Procedimiento para la evolución adaptativa en laboratorio de microorganismos utilizando un quimiostato. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demuestra el aislamiento selectivo y el crecimiento de bacterias adaptadas al estrés a partir de un cultivo expuesto a condiciones prolongadas de estrés. El cultivo se coloca sobre agar que contiene un factor de estrés, y se selecciona una sola colonia para inocular un medio líquido con el factor de estrés. La absorbancia se mide a...

Fuente: Villela, H. D. M. , et al. Prospección de cepas microbianas para biorremediación y desarrollo probiótico para la investigación y preservación de metaorganismos. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo muestra el aislamiento de bacterias marinas degradadoras de contaminantes mediante dilución en serie, selección de colonias y crecimiento en un medio que contiene EE2. Al utilizar EE2 como única fuente de carbono, el protocolo identifica cepas bacterianas capaces de metabolizar este contaminante...

Fuente: Villela, H. D. M. , et al. Prospección de cepas microbianas para biorremediación y desarrollo probiótico para la investigación y preservación de metaorganismos. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demuestra el aislamiento selectivo de bacterias marinas degradadoras del petróleo mediante el enriquecimiento de muestras de agua de mar en medios petrolíferos, permitiendo la recuperación de cepas puras con posibles aplicaciones en la biorremediación del petróleo crudo y la limpieza ambiental.

Fuente: Berens, C. et al. Aplicación de un sistema de expresión inducible para estudiar la interferencia de los factores de virulencia bacteriana con la señalización intracelular. J. Vis. Exp. (2015)Este vídeo demuestra el uso de un sistema de expresión inducible para identificar dónde la proteína efectora bacteriana CaeB interrumpe la cascada apoptótica del huésped. Describe los pasos para transfectar células que expresan CaeB con un sistema sensible a la tetraciclina para inducir la expresión...

Fuente: Wei, D., et al., Producción de productos químicos por Klebsiella pneumoniae utilizando hidrolizado de bambú como materia prima. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra la conversión microbiana de azúcares derivados del bambú en 2,3-butanediol mediante el cultivo de Klebsiella pneumoniae en un medio basado en hidrolizado bajo condiciones microaeróbicas y ligeramente ácidas.

Fuente: Hemmerich, J., et al. Protocolo para la optimización de la producción de proteínas heterólogas utilizando tecnología automatizada de microbioreadores. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demuestra el uso de un microbioreactor automatizado para monitorizar el crecimiento bacteriano y la secreción de proteínas fluorescentes en respuesta a diferentes formulaciones de medios. Una bacteria genéticamente modificada que expresa una proteína fluorescente secretora se cultiva bajo selección...

Fuente: Lea-Smith, D. J., et al. Generación de mutantes marcados y sin marcadores en especies modelo de cianobacterias. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra la criopreservación de cepas cianobacterianas combinando suspensiones celulares concentradas con glicerol o DMSO y almacenándolas a bajas temperaturas, permitiendo el mantenimiento a largo plazo de cultivos viables para la fotosíntesis y estudios genéticos.

Fuente: Arias, S. L., et al. Fabricación de una nanocelulosa bacteriana magnética funcionalizada con nanopartículas de óxido de hierro. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra la síntesis in situ de nanopartículas de magnetita dentro de una película bacteriana de nanocelulosa producida por Gluconacetobacter xylinus. Explica cómo se genera la nanocelulosa bacteriana magnética mediante la infusión de iones de hierro, la precipitación alcalina y la purificación.

Fuente: Rufián, J. S., et al, Análisis unicelular de la expresión de genes de Pseudomonas syringae en el tejido vegetal. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra un método de presión basado en jeringuilla para extraer bacterias apoplásicas, que proliferan y forman microcolonias dentro del apoplasto, el espacio intercelular entre las células vegetales. El método proporciona muestras bacterianas libres de residuos adecuadas para análisis de células individuales posteriores.

Fuente: Becker, B., et al. Un ensayo reportero simple basado en fluorescencia para identificar los componentes celulares necesarios para el tráfico de la cadena de la toxina A de la ricina (RTA) en levaduras. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra la expresión inducible de la cadena de la toxina ricina A (RTA) marcada con Him en Escherichia coli. Describe los pasos implicados en el cultivo selectivo de bacterias transformadas con un plásmido de expresión recombinante, la inducción de la...

Fuente: Pokhrel, A., et al. Ensayo de polifosfato inorgánico en bacterias. J. Vis. Exp. (2019).Este video muestra un ensayo colorimétrico para medir polifosfato inorgánico (poliP) en muestras bacterianas. El procedimiento consiste en convertir enzimáticamente poliP en fosfato libre, que luego reacciona con molibdato y ácido ascórbico para producir un complejo de color azul. Al comparar la absorbancia de este complejo con una curva estándar de concentraciones de fosfato conocidas, se puede...

Fuente: Choi, H. J., et al. Acústica microfluídica para la separación fluvial de bacterias gramnegativas mediante perlas de afinidad de aptámeros. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra el método de separar selectivamente bacterias gramnegativas de una muestra bacteriana mixta utilizando microperlas recubiertas de aptámero y fuerzas acústicas dentro de un chip microfluídico.

Fuente: Brodl, E., et al. Medición in situ y correlación de la densidad celular y la emisión de luz de bacterias bioluminiscentes. J. Vis. Exp. (2018).Este video demuestra la medición y correlación de la bioluminiscencia con la densidad celular en bacterias transformadas. Se utiliza una sola colonia bacteriana para iniciar un cultivo líquido. El cultivo se coloca en un pocillo a la concentración celular deseada. Se agregan un antibiótico y un inductor para expresar el gen requerido para la...

Fuente: Koeth, L. M., et. al., Un método de microdilución de caldo de referencia para pruebas de susceptibilidad in vitro a dalbavancina de bacterias que crecen aeróbicamente. J. Vis. Exp. (2015).Este video demuestra el método de microdilución en caldo para determinar la concentración inhibitoria mínima (MIC) de un antibiótico lipoglicopéptido contra bacterias grampositivas. Cubre el aislamiento de colonias bacterianas, la dilución, la inoculación de pocillos de microplacas con diferentes...

Fuente: Zhang, X. et. al., Un modelo de embrión de pez cebra para la visualización in vivo y el análisis intravital de la infección por Staphylococcus aureus asociada a biomateriales. J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra un modelo de embrión de pez cebra para estudiar infecciones relacionadas con biomateriales implantados. La inyección de microesferas de poliestireno de Staphylococcus aureus mejora la supervivencia bacteriana, lo que confirma el papel promotor de infecciones de los materiales...

Fuente: Yeung, M., et al. Desarrollo de un medio de agar cromogénico más sensible y específico para la detección de Vibrio parahaemolyticus y otras especies de Vibrio . J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra un método basado en cultivos para identificar especies de Vibrio , destacando el agar cromogénico como una alternativa más precisa al agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa o TCBS de uso común. El agar cromogénico proporciona una diferenciación superior de las cepas de Vibrio al...

Fuente: Al Ahmar, R., et al. Cultivo de la variante de colonias pequeñas de Pseudomonas aeruginosa y cuantificación de su alginato. J. Vis. Exp. (2020)Este video muestra un ensayo colorimétrico para cuantificar el alginato producido por Pseudomonas aeruginosa, utilizando carbazol para detectar ácidos urónicos después de la hidrólisis ácida. El método permite el análisis comparativo de la producción de alginato normalizada a la biomasa bacteriana en investigación y estudios clínicos.

Fuente: Al Ahmar, R., et al. Cultivo de la variante de colonias pequeñas de Pseudomonas aeruginosa y cuantificación de su alginato. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra un inmunoensayo colorimétrico para cuantificar el alginato, un exopolisacárido protector producido por Pseudomonas aeruginosa. El procedimiento consiste en recubrir una microplaca con la muestra, aplicar anticuerpos específicos y utilizar una reacción enzima-sustrato para generar un cambio de color medible. Luego se usa una...

Fuente: Hassan, J. A., et al. Identificación de alto rendimiento de resistencia a Pseudomonas syringae pv. Tomate en tomate usando el ensayo de inundación de plántulas. J. Vis. Exp. (2020).Este video demuestra un método para detectar resistencia bacteriana en diferentes cepas de tomate utilizando plántulas de diez días inoculadas con una suspensión bacteriana. Explica cómo las bacterias invaden a través de los estomas, entregan proteínas efectoras para suprimir la inmunidad de las plantas y...

Fuente: Anderson, Q. L. et al. Un patosistema de C. elegans de alto rendimiento, alto contenido y base líquida. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra un método de detección de alto rendimiento que utiliza Caenorhabditis elegans para estudiar las eliminaciones de genes durante las interacciones huésped-patógeno. Describe el procedimiento para preparar gusanos derribados y transferirlos a placas de ensayo para evaluar los efectos de la muerte de gusanos inducida por patógenos.

Fuente: Cayron, J. y Lesterlin, C. Análisis multiescala del crecimiento bacteriano bajo tratamientos de estrés. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra el procedimiento para evaluar la filamentación de E. coli y la replicación del ADN bajo tratamiento con antibióticos inhibidores de la división celular utilizando placas para medir la viabilidad y citometría de flujo para analizar el tamaño de la célula y el contenido de ADN.

Fuente: Cheng, C., et al. Inactivación de patógenos mediante fotólisis con luz visible de riboflavina-5′-fosfato. J. Vis. Exp. (2022).En este video, una mezcla de reacción tamponada que contiene L-metionina, nitro azul tetrazolio (NBT) y mononucleótido de flavina (FMN) se irradia con luz violeta para inducir la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Esto conduce a la inactivación bacteriana y a la formación de formazán detectable espectrométricamente.

Fuente: Weber, N. et. al., Transformación natural, expresión de proteínas y crioconservación de la cianobacteria filamentosa Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra un ensayo basado en LED enfocado para estudiar la fototaxis en cianobacterias filamentosas. Las bacterias migran hacia la fuente de luz, formando una densa acumulación en el centro iluminado, que se visualiza y cuantifica mediante el análisis de intensidad de píxeles de la imagen capturada.

Fuente: Balczon, R., et al. Métodos para detectar amiloides citotóxicos después de la infección de células endoteliales pulmonares por Pseudomonas aeruginosa. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el protocolo para cuantificar amiloides en sobrenadantes de cultivo de células endoteliales pulmonares infectadas con bacterias virulentas, utilizando tioflavina T, un colorante fluorescente que se une a las estructuras de láminas beta amiloides. Un aumento en la fluorescencia en comparación con la...

Fuente: Speare, L., et al. Ensayo de coincubación para cuantificar las interacciones competitivas entre aislados de Vibrio fischeri . J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra un ensayo de coincubación utilizado para estudiar cómo compiten las cepas bacterianas en un entorno compartido. Se aplica ampliamente en microbiología para identificar mecanismos, como la muerte dependiente o independiente del contacto, que impulsan estas interacciones.

Fuente: Venkateswaran, S., et al. Identificación de alto rendimiento de polímeros repelentes de bacterias para dispositivos médicos. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra un método de alto rendimiento para identificar polímeros repelentes de bacterias utilizando un portaobjetos de microarrays expuesto a cultivos bacterianos mixtos. La unión bacteriana se evalúa mediante fluorescencia DAPI, donde la señal reducida indica polímeros con una unión superficial mínima.

Fuente: Barber, A. E., et al. Preparación y aplicación de un nuevo biosensor bacteriano para la detección presuntiva de residuos de disparos. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra la detección de analitos específicos utilizando un biosensor bacteriano. Se toma un cultivo bacteriano que lleva un plásmido con un gen de proteína fluorescente roja (RFP) bajo un promotor sensible al analito. Después de limpiar a fondo la superficie de prueba, una pequeña sección de la toallita se sumerge en el...

Fuente: Augimeri, R. V. et. al., Utilización del compuesto liberador de etileno, ácido 2-cloroetilfosfónico, como herramienta para estudiar la respuesta del etileno en bacterias. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra el efecto del etileno generado por el ácido 2-cloroetilfosfónico (CEPA) en el crecimiento bacteriano y la producción de celulosa. El etileno activa las vías de señalización que estimulan la síntesis de celulosa, lo que resulta en una mayor formación de películas. Estos resultados...

Fuente: Cayron, J., et al. Análisis multiescala de tratamientos de crecimiento bacteriano bajo estrés. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra cómo preparar y usar una placa microfluídica para obtener imágenes de células bacterianas en condiciones de estrés. Describe el proceso de introducción de un cultivo bacteriano y un medio antibiótico que induce estrés, seguido de la carga celular y la configuración microscópica. A continuación, se utilizan imágenes de lapso de tiempo en modo de...

Fuente: Sekar, A., et. al., Un método novedoso para determinar la actividad antibacteriana longitudinal de los materiales liberadores de fármacos. J. Vis. Exp. (2023)Este video demuestra un ensayo basado en luminiscencia para evaluar la eficacia antibacteriana de una tira polimérica cargada de antibióticos mediante la cuantificación de la luminiscencia impulsada por ATP, que disminuye en los cultivos bacterianos expuestos al antibiótico.

Fuente: Zhu, W. y Chu, W. Método visual sensible para la detección de bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra un método visual sensible para la detección rápida de bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno. Un cambio de color de amarillo a negro indica actividad bacteriana a través de la formación de sulfuro de bismuto.

Fuente: Bennett, J. A., et al. Evaluación visual y microscópica de mutantes del desarrollo de Streptomyces. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el cultivo y la comparación fenotípica de cepas de Streptomyces coelicolor de tipo salvaje y mutante. Describe los procedimientos para minimizar las mutaciones espontáneas, prevenir la contaminación cruzada y promover el crecimiento bacteriano a través de técnicas de siembra adecuadas. Finalmente, el video destaca las diferencias visuales en la...

Fuente: Francis, M. B., et al. Detección de fragmentos de corteza durante la germinación de esporas bacterianas. J. Vis. Exp. (2016).Este video demuestra un método colorimétrico para detectar la degradación de la corteza durante la germinación de esporas bacterianas midiendo la liberación de azúcares reductores a lo largo del tiempo. Utilizando estándares de N-acetilglucosamina y muestras de puntos de tiempo, el ensayo cuantifica la concentración de azúcar a través de una reacción cromogénica...

Fuente: Stenzler, B. R. et. al., Un ensayo biosensor anaeróbico para la detección de mercurio y cadmio. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra el uso de biosensores bacterianos modificados genéticamente para medir con precisión la fracción biodisponible de iones de mercurio en condiciones anaeróbicas. Al variar la concentración de sulfato de magnesio, el ensayo garantiza que el biosensor responda selectivamente a los iones de mercurio libres, como lo indican los cambios en la intensidad de la...

Fuente: Vidilaseris, K., et al. Detección de inhibidores de la pirofosfatasa unidos a la membrana de Thermotoga maritima . J. Vis. Exp. (2019)Este video muestra un ensayo colorimétrico para detectar inhibidores de la pirofosfatasa bacteriana unida a la membrana (mPPasa) mediante la cuantificación de la liberación de ortofosfato. El método permite la identificación de compuestos que inhiben la mPPasa de Thermotoga maritima, un posible objetivo farmacológico antimicrobiano.

Fuente: Sarathy, J. P. et al. Un ensayo de unión a caseum in vitro que predice la penetración del fármaco en las lesiones tuberculosas. J. Vis. Exp. (2017)Este video muestra un ensayo in vitro para medir la unión del fármaco al caseum de las lesiones tuberculosas mediante diálisis de equilibrio rápido. Describe los pasos para preparar suspensiones de caseum, realizar diálisis y calcular la fracción de fármaco no unido para predecir la penetración del fármaco en caseum.

Fuente: Rugjee, K. N. et. al., Establecimiento de una configuración de alto rendimiento para el cribado de moléculas pequeñas que modulan la señalización de c-di-GMP en Pseudomonas aeruginosa. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra la generación de una cepa reportera cíclica sensible a di-GMP en Pseudomonas aeruginosa mediante electroporación. La transformación exitosa se confirma mediante la selección de antibióticos y el análisis basado en...

Fuente: Rugjee, K. N., et al. Establecimiento de una configuración de alto rendimiento para el cribado de moléculas pequeñas que modulan la señalización de c-di-GMP en Pseudomonas aeruginosa. J. Vis. Exp. (2016).Este video demuestra la detección de moduladores cíclicos de di-GMP utilizando bacterias modificadas genéticamente que expresan proteína verde fluorescente (GFP) bajo el control de un promotor sensible a c-di-GMP. La fluorescencia se mide en una placa de pocillos múltiples que contiene...

Fuente: Chapman, I. J., et al., Optimización de la sonda molecular para determinar la mortalidad celular en un organismo fotosintético (Microcystis aeruginosa) mediante citometría de flujo. J. Vis. Exp. (2016)Este video demuestra el método para distinguir células vivas y muertas de Microcystis aeruginosa mediante la combinación del etiquetado de sondas fluorescentes con el análisis de citometría de flujo de la autofluorescencia de ficocianina y la señal de la sonda.

Fuente: Nickling, J. H., et.al. Péptidos antimicrobianos producidos por la incorporación selectiva de aminoácidos no canónicos a presión. J. Vis. Exp. (2018)Este video muestra un ensayo de difusión de pocillos de agar utilizado para evaluar la actividad antimicrobiana de las variantes de nisina. Muestra cómo Lactococcus lactis que expresa la peptidasa unida a la membrana NisP activa los precursores de nisina producidos en E. coli, lo que da como resultado halos de inhibición del crecimiento. El...

Fuente: Tokunou, Y., et al, Detección electroquímica del efecto del isótopo cinético de deuterio sobre el transporte de electrones extracelulares en Shewanella oneidensis MR-1. J. Vis. Exp. (2018)Este video demuestra un método electroquímico de célula completa para evaluar cómo la transferencia de protones afecta el transporte extracelular de electrones (EET) en bacterias electroactivas. Al reemplazar los protones con deuterones usando óxido de deuterio, el método mide los cambios en la...

Fuente: Dodge, R., et al. Conteo rápido de unidades formadoras de colonias en formato de placa de 96 pocillos aplicado al microbioma de Drosophila . J. Vis. Exp. (2023)Este video demuestra la cuantificación de las unidades formadoras de colonias (UFC) de bacterias asociadas al intestino en moscas Drosophila utilizando un enfoque de dilución y siembra en serie. Las muestras de moscas homogeneizadas que contienen bacterias intestinales se diluyen en serie, se siembran en agar y se incuban para...

Fuente: Maurakis, S., et al. Crecimiento limitado por metales de Neisseria gonorrhoeae para la caracterización de genes sensibles a metales y adquisición de metales de ligandos huéspedes. J. Vis. Exp. (2020).Este video demuestra un ensayo de crecimiento bacteriano limitado por metales para estudiar el papel de los genes sensibles a los metales. Las bacterias mutantes y de tipo salvaje cultivadas en un medio sin metal se incuban con ligando metálico y su crecimiento se monitorea mediante un...

Fuente: Maurakis, S. y Cornelissen, C. N. Crecimiento limitado por metales de Neisseria gonorrhoeae para la caracterización de genes sensibles a metales y adquisición de metales de ligandos huéspedes. J. Vis. Exp. (2020)Este video demuestra el procedimiento para detectar transportadores de metales de superficie en Neisseria gonorrhoeae cultivados en condiciones limitadas de metales mediante un ensayo de transferencia de puntos, que involucra la unión de ligandos, la detección de anticuerpos y...

Fuente: Chen, Y., et al., Medición de tasas de traducción errónea de micobacterias específicas con sistemas informadores de ganancia de función. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra un método para cuantificar la traducción errónea en Mycobacterium smegmatis utilizando un GFP inducible y un sistema reportero de luciferasa mutante secretada. Muestra cómo se mide la luminiscencia resultante de una traducción incorrecta y se compara con la fluorescencia de GFP para evaluar el impacto de una...

Fuente: Gilmore, S. F. et al. Producción a escala libre de células y adición adyuvante a una proteína principal de membrana externa recombinante de Chlamydia muridarum para el desarrollo de vacunas. J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra el uso de Western blot para evaluar la integridad estructural de la proteína principal de la membrana externa (MOMP) dentro de complejos de vacunas basados en nanopartículas. Describe los pasos clave involucrados en la transferencia de proteínas, el etiquetado...

Fuente: Stefan, A., et al. Los beneficios multifacéticos de la coexpresión de proteínas en Escherichia coli. J. Vis. Exp. (96), (2015).Este video demuestra la evaluación de la frecuencia de mutación en bacterias mediante un ensayo de beta-glucosidasa. Los cultivos bacterianos que expresan una ADN polimerasa deficiente en corrección de pruebas se recolectan durante generaciones sucesivas. Los errores de replicación causados por la reducción de la corrección pueden activar un gen de...

Fuente: Jian, X. et. al., Cultivo microbiano automatizado y evolución adaptativa mediante el sistema de cultivo de microgotas microbianas (MMC). J. Vis. Exp. (2022)Este video demuestra el uso de una plataforma basada en gotas microfluídicas para el monitoreo en tiempo real del crecimiento bacteriano. Al generar gotas uniformes que contienen suspensiones bacterianas y guiarlas a través de una vía de detección, el sistema permite la medición óptica continua de la densidad celular para construir...

Tome un cultivo de Corynebacterium glutamicum, transformado con un plásmido que lleva un gen reportero fluorescente aguas abajo del antiterminador del ácido ribonucleico o secuencia RAT, en una placa de pocillos múltiples.Durante la transcripción, el RAT-ARN forma una estructura de bucle de tallo que bloquea la ARN polimerasa, deteniendo la expresión génica reportera.El plásmido también expresa constitutivamente LicV, una proteína de fusión que comprende la proteína de unión al ARN RAT, LicT, y...

Comience con una suspensión que contenga células bacterianas tratadas con nanopartículas de plata suspendidas en una matriz de exopolisacáridos.Agregue un tampón de fosfato a la suspensión para mantener un pH estable.A continuación, introduzca una solución que contenga glucosa y un indicador redox soluble, luego incube la mezcla. El indicador redox actúa como un aceptor de electrones.Durante la incubación, la glucosa y el indicador redox ingresan a las células bacterianas metabólicamente...

Tome diluciones seriadas de un cultivo bacteriano y agregue alícuotas en viales calorimétricos que contengan medio de crecimiento.Cargue los viales sellados en la placa de pocillos múltiples de un microcalorímetro isotérmico para medir la producción de calor metabólico.El dispositivo se mantiene a una temperatura constante para garantizar que el calor detectado se origine únicamente en el metabolismo bacteriano.A medida que las bacterias metabolizan los nutrientes y proliferan, liberan calor...

Fuente: Ali, I., et al. Cribado de alto rendimiento de aislados microbianos con impacto en la salud de Caenorhabditis elegans . J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demuestra un ensayo fluorescente de alto rendimiento para evaluar cómo las bacterias intestinales afectan la resiliencia al estrés en Caenorhabditis elegans. Al rastrear la fluorescencia azul de los gránulos intestinales rotos, el ensayo revela señales de muerte más tempranas en gusanos expuestos a bacterias de prueba.

Fuente: Sutlief, A. L., et al. Análisis de células vivas del esfuerzo de cizalladura en Pseudomonas aeruginosa utilizando un sistema microfluídico automatizado de mayor rendimiento. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo demuestra la preparación de una placa microfluídica para estudios de esfuerzos cortantes en cultivos bacterianos. Tras cebar los canales con un medio, se introducen células bacterianas en el canal experimental e incuban para su inserción. Se retiran medios residuales y cultivos para...

Fuente: Brumfield, K. D., et al. Técnicas de laboratorio utilizadas para mantener y diferenciar biotipos de aislados clínicos y ambientales de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra un ensayo de agar blando utilizando cloruro de trifeniltetrazolio para evaluar y comparar la motilidad de cepas de Vibrio cholerae visualizando la actividad metabólica a través de la formación de zonas rojas alrededor de células activamente migratorias.

Fuente: Brumfield, K. D., et al., Técnicas de laboratorio utilizadas para mantener y diferenciar biotipos de aislados clínicos y ambientales de Vibrio cholerae . J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demuestra la prueba Voges-Proskauer (VP) para diferenciar entre tres biotipos de Vibrio cholerae: clásico, tipo salvaje El Tor y variante El Tor. Cada cultivo se inocula en un medio que contiene glucosa, se incuba y se trata con α-naftol e hidróxido potásico para detectar la presencia de acetoína. Un...

Fuente: Mettrick, K. A., Lawrence, et al., Induciendo una obstrucción de replicación específica en sitio en E. coli usando un sistema operador de represor fluorescente. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra la obstrucción específica del yacimiento de replicación en Escherichia coli utilizando la expresión inducida por arabinosa de TetR marcado con proteínas fluorescentes amarillas que se une a las matrices cromosómicas de tetO.

Fuente: Domesle, K. J., et al. Amplificación isotérmica mediada por lazos para el cribado de Salmonella en alimentos de origen animal y la confirmación de Salmonella por aislamiento en cultivo. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demuestra la técnica de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) para detectar un gen bacteriano objetivo amplificando el ADN a temperatura constante. La mezcla de reacción se prepara añadiendo una mezcla maestra isotérmica, cebadores específicos para el gen...

Fuente: Aigrain, L., et al. Internalización y observación de biomoléculas fluorescentes en microorganismos vivos mediante electroporación. J. Vis. Exp. (2015)El vídeo demuestra la entrega de biomoléculas fluorescentes en células microbianas electrocompetentes mediante electroporación. El proceso comienza con la introducción de ADN o proteínas marcadas con fluoróforo en una suspensión celular refrigerada. A continuación, se aplica un pulso de alto voltaje para crear poros temporales de...

Fuente: Kurokawa, M., et al. Análisis preciso y de alto rendimiento del crecimiento bacteriano. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra la cuantificación de alto rendimiento del crecimiento bacteriano utilizando un lector de microplacas. Describe los pasos implicados en la preparación del cultivo, la medición de la densidad óptica y el análisis de la dinámica del crecimiento.

Fuente: Dahl, J. et al. Detección de la actividad dependiente de pH de Escherichia coli Chaperona HdeB In Vitro e In Vivo. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra un ensayo basado en un espectrofotómetro de fluorescencia para evaluar la actividad de chaperonas en una proteína sustrato sometida a estrés ácido y térmico. Describe los pasos para monitorizar el despliegue y la agregación del sustrato mediante dispersión de luz, comparando las condiciones con y sin el acompañante.

Fuente: Dahl, J., et al. Detección de la actividad dependiente de pH de Escherichia coli Chaperona HdeB In Vitro e In Vivo. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra el uso de cultivos recombinantes de E. coli para evaluar el efecto protector de una chaperona activada por ácido durante el estrés ácido. El monitoreo del crecimiento bacteriano revela una mayor supervivencia en cultivos que expresan chaperones en comparación con los controles, lo que pone de manifiesto el papel de las chaperonas en...

Fuente: Stenum, T. S., et al. Cuantificación de la abundancia y los niveles de carga de ARN de transferencia en Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra el uso de electroforesis en gel y blot septentrional para detectar y comparar los niveles de carga de los ARN de transferencia en E. coli separando las formas aminoaciladas y desaciladas.

Fuente: Gulla, S., et al. Análisis tándem-repetición multilocus de la bacteria patogénica de peces Yersinia ruckeri mediante PCR multiplex y electroforesis capilar. J. Vis. Exp. (2019).Este vídeo muestra el procedimiento para separar amplicones de repetición en tándem de número variable marcados con fluorescencia (VNTR), derivados de una bacteria patogénica de peces, utilizando electroforesis capilar para generar perfiles electroferográficos específicos por tamaño para la identificación...

Fuente: Hockett, K. L. y Baltrus, D. A. Uso de la técnica de superposición de agar blando para detectar compuestos inhibidores producidos por bacterias. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo muestra el procedimiento para detectar la muerte mediada por bacteriocina detectando sobrenadante de una cepa donante inducida por antibióticos sobre una capa de agar blando que contiene una cepa de prueba. Las zonas claras formadas tras la incubación indican inhibición bacteriana.

Fuente: Cabeen, M. T., et al. Análisis microfluídico de célula única de Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2018)El vídeo demuestra el uso de un dispositivo microfluídico para observar el crecimiento bacteriano a nivel de célula única. Muestra cómo las células bacterianas no móviles, confinadas en trincheras a microescala, son continuamente nutridas e imaginadas bajo un microscopio de fluorescencia. La configuración permite la visualización en tiempo real de la división celular y el seguimiento de...

Fuente: Scheidweiler, D., et al. Combinar dispositivos fluídicos con microscopía y citometría de flujo para estudiar el transporte microbiano en medios porosos a escalas espaciales. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demuestra el uso de un dispositivo microfluídico para cuantificar la motilidad bacteriana a través de una matriz porosa compuesta por pilares dispuestos aleatoriamente. Se introducen bacterias marcadas con fluorescencia en el dispositivo, se fotografían mediante microscopía a medida...

Fuente: Kim, H. et al., Cribado Multienzimático usando un sistema de cribado enzimático genético de alto consumo. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demuestra un método de cribado genético para detectar la expresión enzimática utilizando bibliotecas metagenómicas de fosmid y sustratos cromogénicos. La citometría de flujo identifica y aísla células individuales que producen productos coloreados, permitiendo la selección de alto rendimiento de células activas que expresan enzimas.

Fuente: Samuels, D. J., et al. Un enfoque basado en cromatografía líquida en tándem y espectrometría de masas para el análisis de metabolitos de Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra el uso de la cromatografía líquida–espectrometría de masas para identificar y cuantificar metabolitos intracelulares de S. aureus. Describe los pasos implicados en la extracción de metabolitos, la normalización de péptidos, la cromatografía líquida y el análisis de espectrometría de masas.