Evaluación de las interacciones bacteria-célula huésped mediante perlas biomiméticas

Abstract

Fuente: Stones, D. H., et al. Materiales biomiméticos para caracterizar las interacciones bacteria-huésped. J. Vis. Exp. (2015)

Este video demuestra el uso de perlas bacteriomiméticas para cuantificar la adhesión bacteriana a las células epiteliales del huésped en condiciones competitivas. Describe los pasos involucrados en el tratamiento de las células, la lisis y la siembra de diluciones en serie para medir las unidades formadoras de colonias.

Protocol

1. Medición de la adhesión bacteriana
   1. En los puntos de tiempo indicados (por ejemplo, 1 hora después de la infección), retire el medio de la capa celular.
   2. Lave bien la capa celular con solución salina estéril y precalentada con fosfato tamponado (PBS) (al menos 3-4 lavados de 1 ml de PBS cada uno) para eliminar las células sueltas.
   3. Lisar las células huésped añadiendo 1 ml de una solución estéril de Triton X-100 al 1 % v/v en PBS por pocillo. Incubar la placa a 37 °C durante 5 min.
   4. Pipetee cada muestra hacia arriba y hacia abajo varias veces antes de transferir el contenido de cada pocillo a tubos separados de 1,5 ml. Prepare diluciones seriadas de muestras 10 veces en PBS estériles (p. ej., use 100 ml de muestra y 900 ml de PBS).
   5. Colocar 100 μl de cada muestra en agar marino Luria-Bertani (MLB) y esparcir con un esparcidor celular. Optimice las diluciones a la placa según las cepas bacterianas y el punto de tiempo.
      Nota: Para la configuración experimental descrita, las diluciones de 10⁵ o 10⁶ veces dan un número adecuado de unidades formadoras de colonias (UFC).
   6. Incubar placas a 37 °C O/N y enumerar las bacterias mediante recuento de colonias.

Materials