Este video demuestra el pretratamiento de macrófagos con vesículas de membrana externa (OMV) de Legionella pneumophila para examinar su efecto sobre la replicación bacteriana. Al alterar la señalización inmune del huésped, los OMV hacen que los macrófagos sean más permisivos a la infección. Los recuentos de colonias más altos en las células tratadas, en comparación con las no tratadas, indican que las OMV promueven la replicación de L. pneumophila dentro de los macrófagos.
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Artículo de método
Ensayo de replicación de Legionella pneumophila en macrófagos pretratados con vesículas de membrana externa
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29 de agosto de 2025
En este artículo
Resumen
Protocolo
1. Pre-tratar macrófagos
- Prepare células THP-1 (células Tohoku Hospital Pediatrics-1, una línea celular de leucemia monocítica humana).
NOTA: THP-1 es una línea celular monocítica derivada de un paciente con leucemia.- Agregue 2x10 5 células THP-1 por 24 pocillos y diferéncielas agregando 20 nM de forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) en células similares a macrófagos. Incubar durante 24 h a 37 °C.
- Reemplace el medio con 500 μL de medio fresco e incube durante otras 24 h; el medio óptimo para las células THP-1 comprende Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) 1640 de glucosa al....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 10 cm Petridish | Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Alemania) | 82.1473 | |
| Carbón activado | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Alemania) | X865.2 | |
| Agar-agar, Kobe I | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Alemania) | 5210.2 | |
| Agar Columbia con 5 % de sangre de oveja | Becton Dickinson GmbH (Heidelberg, Alemania) | 254005 | |
| Nitrato férrico no hidratado | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Alemania) | 5632.1 | |
| Suero fetal de ternero (FCS) | Life Technologies GmbH (Darmstadt, Alemania) | 10270-106 | |
| Heracell 240i Incubadora de dióxido de carbono | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Alemania) | 40830469 | |
| Heraeus Multifuge X3R | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Alemania) | 75004515 | |
| Asa de inoculación | Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Alemania) | 86.1567.010 | |
| L. pneumophila Corby | --- | --- | Amablemente proporcionado por la Prof. Dra. Antje Flieger (RKI, Berlín, Alemania) |
| L. pneumophila Corby ΔflaA | --- | --- | Amablemente proporcionado por el Prof. Dr. Klaus Heuner (RKI, Berlín, Alemania) |
| mBMDM | --- | --- | Amablemente proporcionado por el Prof. Dr. Markus Schnare (Philipps Univeristy Marburg, Marburg, Alemania) y el Prof. Dr. Carsten Kirschning (Universidad de Duisburg Essen, Essen, Alemania) |
| PBS | Biochrom GmbH (Berlín, Alemania) | L 1825 | |
| Phorbol 12-miristato 13-acetato | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen, Alemania) | P8139-1MG | |
| Agitador giratorio (MaxQ 6000) | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Alemania) | SHKE6000 | |
| RPMI 1640 glucosa alta | Life Technologies GmbH (Darmstadt, Alemania) | 11875-093 | |
| Saponin | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Alemania) | 9622.1 | |
| Ultrospec 10 | Biochrom Ltd (Cambridge, Inglaterra) | 80-2116-30 | |
| THP-1 | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Taufkirchen, Alemania) | 88081201-1VL | |
| Sorvall Discovery 100 SE | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Braunschweig, Alemania) | ||
| Extracto de levadura | Carl Roth GmbH & Co KG (Karlsruhe, Alemania) | 2363.2 |
