Un método de microdilución en caldo para pruebas de susceptibilidad a antibióticos de bacterias grampositivas

Resumen

Fuente: Koeth, L. M., et. al., Un método de microdilución de caldo de referencia para pruebas de susceptibilidad in vitro a dalbavancina de bacterias que crecen aeróbicamente. J. Vis. Exp. (2015).

Este video demuestra el método de microdilución en caldo para determinar la concentración inhibitoria mínima (MIC) de un antibiótico lipoglicopéptido contra bacterias grampositivas. Cubre el aislamiento de colonias bacterianas, la dilución, la inoculación de pocillos de microplacas con diferentes concentraciones de antibióticos y la verificación de la pureza del cultivo y los recuentos celulares. El video también explica cómo la unión de antibióticos interrumpe la síntesis de la pared celular, lo que lleva a la lisis, y cómo identificar la CMI en función de la inhibición visible del crecimiento.

Protocolo

1. Preparar diluciones del panel de CMI

1. Preparar una solución madre no superior a 1.600 μg/ml de dalbavancina en dimetilsulfóxido (DMSO) puro (puro) en tubos estériles de vidrio o plástico, y utilizar el mismo día de la preparación o almacenar a -20 a -60 °C o menos para su uso futuro en un congelador sin descongelación. Tenga en cuenta la potencia de la dalbavancina según lo dispuesto en la documentación recibida con el polvo al pesar el polvo.
2. Diluya la dilución de la pasta de manera similar al esquema con DMSO puro en tubos estériles de vidrio o plástico. Utilice una pipeta para medir el diluyente y otra pipeta para añadir el stock inicial de dalbava....

Materiales