Un método visual sensible para la detección de bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno

Abstract

Fuente: Zhu, W. y Chu, W. Método visual sensible para la detección de bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra un método visual sensible para la detección rápida de bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno. Un cambio de color de amarillo a negro indica actividad bacteriana a través de la formación de sulfuro de bismuto.

Protocol

1. Cepas bacterianas

NOTA: Para este experimento, se utilizaron nueve cepas estándar, incluidas Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris y Klebsiella pneumoniae. Salmonella paratyphi A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa y Proteus vuigaris pueden producir H₂S.

1. Preparación de cultivo bacteriano
   1. Transferir una colonia bacteriana de Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 y Klebsiella pneumoniae de una placa de agar Luria-Bertani (LB) a 100 mL de medio LB y cultivar a 37 °C durante 12-16 h hasta que la concentración bacteriana sea de aproximadamente 1 x 10⁹ células/mL (como se indica en OD₆₀₀ = 1).
   2. Transfiera una colonia bacteriana de Fusobacterium nucleatum y Proteus vuigaris de placas de agar de caldo de soja tripticasa (TSB) a 100 ml de medio TSB y cultive anaeróbicamente a 37 ° C durante 24 h hasta que la concentración bacteriana sea de aproximadamente 1 x 10⁹ células / ml (como lo indica OD₆₀₀ = 1).

2. Ensayo de detección de H₂S

1. Prueba de producción de sulfuro de hidrógeno
   1. Mezclar 100 μL de cultivo bacteriano con 100 μL de solución de bismuto recién preparada (pH 8,0; 10 mM de cloruro de bismuto (III), 0,4 M de trietanolamina-HCl, 20 mM de piridoxal 5-fosfato monohidratado, 20 mM de EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) y 40 mM de L-cisteína) en las placas de microtitulación de 96 pocillos y cultivo durante 20 min a 37 °C. Para cada cepa bacteriana, realice el análisis por triplicado.
   2. Después de 20 minutos, verifique si hay cambio de color. Si el color de la solución cambia de amarillo claro a negro, esto indica que la bacteria puede producir H₂S. Repita esta medición 3 veces.
2. Sensibilidad del método
   1. Determine la sensibilidad del método utilizando diferentes concentraciones de hidrosulfuro de sodio (NaHS): 2 mM, 1 mM, 0,8 mM, 0,6 mM, 0,4 mM, 0,2 mM, 0,1 mM y 0 mM, mezclado con solución BS (sulfuro de bismuto).
   2. Determine la presencia de HS⁻/S²⁻ observando la formación de un precipitado negro de BS. Marque el color de los pocillos utilizando una escala visual desde la producción de color nulo (-) hasta la producción de color negro más oscuro (++++++).

Materials