Este video demuestra un método basado en cultivos para identificar especies de Vibrio , destacando el agar cromogénico como una alternativa más precisa al agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa o TCBS de uso común. El agar cromogénico proporciona una diferenciación superior de las cepas de Vibrio al detectar actividades enzimáticas específicas de la especie.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Un nuevo medio cromogénico para la detección rápida de especies de Vibrio
780 visualizaciones
⸱
26 de septiembre de 2025
En este artículo
Resumen
Protocolo
Crecimiento en medios selectivos y diferenciales
- De dos a cuatro días antes del experimento, raye todas las cepas microbianas en un medio no selectivo (TSAS, BHI o agar chocolate) para aislar colonias. Incubar placas a 35-37 °C durante 48 horas. Verifique la pureza de los cultivos observando la morfología de la colonia después de la incubación. Los cultivos puros deberían producir colonias que exhiban una morfología de colonia similar.
- Transfiera algunas colonias aisladas a 5 ml de caldo. Incubar los tubos a 35-37 °C durante 16-24 horas.
NOTA: Use colonias jóvenes, que tengan menos de cuatro días, para preparar cultivos durante la noche en todos los experimentos.
- Raye un bucle lleno de cultivos nocturnos en medios selectivos y diferenciales (TCBS y agar cromogénico) para el aislamiento de colonias. Incubar placas a 35-37 °C durante un máximo de 96 horas.
- Registre el crecimiento general de todas las cepas examinando tanto la densidad de cultivo en la placa como el tamaño de las colonias aisladas. Registre el color de las colonias bajo luz ambiental y / o ultravioleta. Tenga en cuenta otras características de la colonia aislada, como la elevación, el margen y la forma.
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Reactivo/Equipo | |||
| Agar-agar | Fisher Scientific | DF0140-15-4 | puede usar otras marcas |
| BHI en polvo | Fisher Scientific | DF0418-17-7 | puede usar otras marcas |
| Generador de gas CampyGen | Diagnóstico Hardy | CN035A | para proporcionar una atmósfera microaerofílica; puede usar otras marcas |
| Platos de agar chocolate | Diagnóstico Hardy | E14 | puede usar otras marcas |
| Tubos de cultivo | Fisher Scientific | S50712 | puede usar otras marcas |
| Placas de agar HardyChrom Vibrio | Diagnóstico Hardy | G319 | Este estudio evalúa este medio |
| Incubadora | Cualquier | ||
| Asas de inoculación | Fisher Scientific | 22-363-606 | En este estudio se utilizó un tamaño de 10 microlitros |
| Placa de Petri | Fisher Scientific | FB0875713 | puede usar otras marcas |
| Pipeta y puntas | Cualquier punta esterilizada | ||
| Polvo TCBS | Diagnóstico Hardy | 265020 | Este estudio evalúa este medio |
| Polvo de TSB | Fisher Scientific | DF0370-07-5 | puede usar otras marcas |
| Gabinete de visualización UV | Cualquier | Emite luz ultravioleta de onda larga | |
| Baño de agua | Cualquier | ||
| Especies y cepas bacterianas | |||
| Aeromonas hydrophila | ATCC | ||
| Candida albicans | ATCC | ||
| Campylobacter jejuni | ATCC | ||
| Escherichia coli | ATCC | ||
| Proteus mirabilis | ATCC | ||
| Pseudomonas aeruginosa | ATCC | ||
| Staphylococcus aureus | ATCC | ||
| Salmonella Choleraesuis | ATCC | ||
| Shigella boydii | ATCC | ||
| Shigella flexneri | ATCC | ||
| Shigella sonnei | ATCC | ||
| Vibrio alginolyticus | ATCC | ||
| V. cholerae (los serotipos incluyen O139, O1, no O1, biovares de El Tor) | FDA, ATCC | ||
| V. damsela | FDA | ||
| V. fisheri | Medio ambiente | ||
| V. fluvialis | CDC | ||
| V. furnissii | CDC | ||
| V. hollisae | FDA | ||
| V. metschnikovii | ATCC | ||
| V. mimicus | FDA | ||
| V. parahaemolyticus (los serotipos incluyen O3: K6, O1: K56, O4: K8, O5: K15, O8, etc.) | ATCC, FDA, CDC, Medio Ambiente | ||
| V. proteolyticus | FDA | ||
| V. vulnificus | FDA |
