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Aislamiento de colonias bacterianas dirigidas mediante degradación de hidrogel con patrón de luz

September 26th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fuente: Fattahi, N., et al. Interfaces de hidrogel fotodegradables para la detección, selección y aislamiento de bacterias. J. Vis. Exp. (2021).

Este video demuestra la extracción de colonias bacterianas de un hidrogel fotodegradable utilizando luz ultravioleta. Se selecciona una colonia específica y se diseña una exposición a la luz con patrón para iniciar la degradación localizada del hidrogel. Después de ajustar la intensidad y la duración de la luz, se aplica la luz ultravioleta, liberando la colonia. Luego, la colonia se aspira a través de un tubo y se transfiere a un tubo para su análisis posterior.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Cepas bacterianas y protocolos de cultivo

  1. Colonias de bacterias en placas de agar complementadas con medios de crecimiento apropiados. En este reporte, B. subtilis (cepa 1A1135, Bacillus Genetic Stock Center) se cultiva en ATGN (0,079 M KH2PO4 (fosfato de dihidrógeno potásico), 0,015 M (NH4)2SO4 (sulfato de amonio), 0,6 mM MgSO4·7H2O (sulfato de magnesio heptahidratado), 0,06 mM CaCl2·2H2O (cloruro de calcio dihidratado), 0,0071 mM MnSO4·H2O (sulfato de manganeso (II) monohidratado), 0,125 M FeSO4·7H2O (sulfat....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

Figura 1: Formación de hidrogel en cubreobjetos de vidrio tiolado. (A) Los espaciadores con un espesor de 12,7 μm se colocan en dos lados opuestos de un cubreobjetos base que contiene grupos tiol reactivos. (B) La solución precursora de hidr.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(3-Mercaptopropil)trietoxisilanoSigma-Aldrich175617-25G> 95%
Detergente en polvo AlconoxAlconox1104 
Sulfato de amonioFisher ChemicalA702-500Granular certificado por ACS
Autoclave SK300CYamato Científico18016 
Bacillus subtilis 1A1135Centro de stock genético de Bacillus1A1135 
Microscopio vertical de campo claroCorporación OlympusBX51 
Cloruro de calcio, anhidroFisher ChemicalC614-500Para desecadores de pellets, malla 4-20
Centrífuga 5702Eppendorf5702 
Ácido cítrico monohidratoSigma-AldrichC1909-500GReactivo ACS, > 99,0%
D-glucosa (dextrosa)VWR Amresco Ciencias de la vida0188-1KG 
Base de elastómero de silicona DOWSIL 184Corporación de siliconas Dow Temperatura de almacenamiento: -30-60 °C
DOWSIL 184 agente de curado de elastómero de siliconaCorporación de siliconas Dow Temperatura de almacenamiento: < 32 C
Espectrofotómetro de microplacas EPOCH2Instrumentos BioTekÉPOCA 2 
Escherichia coli ATCC 25922Thermo Fisher ScientificReferencia R19020 
Etanol anhidroFisher Chemical459844 
Cubierta de vidrio para microscopio FisherbrandFisher Scientific12540A 
Portaobjetos de microscopio premium Fisherfinest lisosFisher Scientific12-544-4 
Solución de peróxido de hidrógenoSigma-Aldrich216763-500MLContiene inhibidor, 30% en peso en H2O
Incu-Shaker MiniPunto de referenciaE5-0014-01 
IsopropanolSigma-Aldrich190764 
Sulfato de magnesio, 7-hidratoMacron Fine Chemicals6066-04Materiales de rendimiento de Avantor, Inc.
MetanolSigma-Aldrich179337-4LReactivo ACS, > 99,8%
Espectrofotómetro NanoDrop OneThermo ScientificND-ONEC-W 
Nitrógeno comprimidoMathesonUN1066 
Limpiador de plasma de oxígenoHarrick PlasmaPDC-001-HP 
Pentaeritritol tetra(mercaptoetilo) polioxietileno (4 brazos-PEG)Corporación NOF AméricaPTE-100SHSunbright-PTE-100SH
Solución salina tamponada con fosfato (PBS), 10XVWR Amresco Ciencias de la vidaK813-500MLAlmacenar entre 15 °C y 30 °C
Polidimetilsiloxano (PDMS) Slygard 184Dow Corning4019862 
Polígono400MightexDSI-D-000 
Portaobjetos de microscopio de primera calidadFisher Scientific12-544-425 x 75 x 1 mm
Cloruro de sodioSigma Ciencias de la VidaS5886-500GBiorreactivo, apto para cultivo celular
Hidróxido sódicoSigma-AldrichS8045-500GBioXtra, > 98%, pellets (anhidros)
Fosfato de sodio monobásico dihidratoSigma-Aldrich71505-250GBioUltra, para biología molecular, > 99,0% (T)
Medidor de espesor de acero inoxidableProductos de la marca Precision77739 
Ácido sulfúricoSigma-Aldrich320501-2.5L 
Tolueno, anhidro, 99,8%Sigma-Aldrich244511-1LAnhidro, > 99,8%
Tricloro (1H, 1H, 2H, 2H perfluorooctilo) silano (TPS), 97%Sigma-Aldrich448931-10G 
Caldo de soja trípticoSigma-Aldrich22092-500GPara microbiología
Sonicador ultrasónicoFischer ScientificFS-110H 

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Photodegradable HydrogelBacterial Colony IsolationLight Patterned DegradationUV Light ExposureFluorescence MicroscopyColony AspirationHydrogel DegradationTargeted Colony ExtractionLight Pattern DesignSyringe Aspiration

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