Un sistema de cocultivo para estudiar las respuestas moleculares de las plantas hospedadoras y las bacterias que interactúan

Resumen

Fuente: Nathoo, N., et al. Un sistema de cocultivo hidropónico para el análisis simultáneo y sistemático de las interacciones moleculares y la señalización de plantas / microbios. J. Vis. Exp. (2017).

Este video demuestra un sistema de cocultivo hidropónico para estudiar las interacciones planta-bacteria en condiciones estériles. Las plántulas de plantas se transfieren a un medio de crecimiento estéril y ácido, se incuban y se inspeccionan para detectar contaminación antes de la inoculación con Agrobacterium. Las bacterias activadas se adhieren a las raíces de las plantas, transfieren ADN-T a las células vegetales y promueven cambios moleculares que mejoran la colonización bacteriana.

Protocolo

1. Sistema de cocultivo hidropónico

1. Preparar medio líquido de Murashige y Skoog (MS): 2,165 g/L de sales basales MS, 10 g/L de sacarosa, 0,25 g/L de ácido 2-(N-morfolino)etanosulfónico (MES) y 59 mL/L de mezcla de vitaminas B5, pH 5,75.
2. Autoclave el medio. Vierta 18 ml en cada tanque estéril de vidrio cilíndrico o plástico transparente (platos cristalizantes, 100 x 80 mm2) con tapas estériles.
   NOTA: Preesteriliza los tanques y las tapas envolviéndolos en papel de aluminio y esterilizando en autoclave.
3. En una campana de flujo esterilizada, use fórceps estériles para transferir suavemente cada cuadrado de malla con plántulas ....

Resultados

Figura 1: Sistema de cocultivo hidropónico planta-microbio. El panel izquierdo representa un diagrama de flujo que describe los seis pasos clave para ensamblar y operar el sistema de cocultivo hidropónico. El panel de la derecha demuestra los m.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Semillas de plantas (Arabidopsis thaliana Col-0)	Centro de Recursos Biológicos de Arabidopsis	CS7000	https://abrc.osu.edu/order-stocks
Bacterias (Agrobacterium tumefaciens C58)	Universidad de Washington	N/A
Bacterias marcadas	interno		opcional, depende de los análisis posteriores
Agua doble destilada	(varios)
Micropipeta	(varios)
Sales basales de Murashige y Skoog (MS)	Sigma-Aldrich	M5524
Sacarosa	(varios)
MES	(varios)
Mezcla de vitaminas B5	Sigma-Aldrich	G1019
Fitoagar	(varios)
Placas de Petri profundas	(varios)
Malla de acero inoxidable	Compañía de artículos de alambre Ferrier Ltd	N/A	Grado: 304; recuento de mallas: 40 × 40; diámetro del cable: 0.01
Cinta de microporos, 1"	3M	1530-1
Cámara de crecimiento diurno	(varios)
Depósitos cilíndricos de vidrio, 100 × 80 mm	Pyrex	3250	Se pueden usar otros tamaños, en cuyo caso es posible que sea necesario ajustar el contenido líquido
Campana de flujo	(varios)
Fórceps	(varios)
Extracto de levadura	(varios)
Triptona	(varios)
MgSO₄	(varios)
Incubadora de agitación	(varios)