Un ensayo multipocillo basado en líquido para la detección de derribos de C. elegans

Abstract

Fuente: Anderson, Q. L. et al. Un patosistema de C. elegans de alto rendimiento, alto contenido y base líquida. J. Vis. Exp. (2018)

Este video demuestra un método de detección de alto rendimiento que utiliza Caenorhabditis elegans para estudiar las eliminaciones de genes durante las interacciones huésped-patógeno. Describe el procedimiento para preparar gusanos derribados y transferirlos a placas de ensayo para evaluar los efectos de la muerte de gusanos inducida por patógenos.

Protocol

1. Adaptación para el cribado de múltiples cepas o derribos de Caenorhabditis elegans (configuración de pantalla de interferencia de ácido ribonucleico (ARNi))

Nota: Esta es una prueba de ARNi descrita para una configuración de placa de 24 pocillos.

1. Agregue 1 ml de S Basal por pocillo de una placa de 24 pocillos que contenga gusanos sembrados con ARNi. Agite suavemente los gusanos agitando la placa, luego transfiera los gusanos a una placa vacía y estéril de 24 pocillos profundos. Deje que los gusanos se asienten gravitacionalmente (~ 5 minutos).
2. Aspirar sobrenadante, dejando aproximadamente 1 mL. Agregue 7 ml de S Basal a cada pocillo.
3. Repita los pasos 1.1 a 1.2 un mínimo de 2 veces más. Después del lavado final, aspire el sobrenadante, dejando aproximadamente 400 μL.
4. Usando la función Remuestreador del clasificador de gusanos, clasifique 22 gusanos de la suspensión de gusanos de placa de 24 pocillos en cada pocillo de una placa de 384 pocillos (cada pocillo de una placa de 24 pocillos produce de 8 a 12 pocillos de una placa de 384 pocillos).
   1. Para evitar la inanición, pipetee las bacterias en placas de 384 pocillos (ya sea una cepa que sirva únicamente como alimento, como OP50, o una cepa patógena) antes de clasificarlas.
5. Después de clasificar los gusanos en la placa de 384 pocillos, agregue moléculas pequeñas u otros materiales específicos del experimento.

Materials