Visualización de la motilidad bacteriana utilizando medio semisólido suplementado con colorante redox

Resumen

Fuente: Chu, W. y Zhuang, X. Visualización de la motilidad bacteriana basada en una reacción de color. J. Vis. Exp. (2022)

Este video demuestra un ensayo de agar semisólido basado en colorantes redox para evaluar la motilidad bacteriana distinguiendo visualmente cepas móviles y no móviles.

Protocolo

Cepas bacterianas

NOTA: Se aislaron ochenta cepas del medio acuático y se identificaron utilizando un instrumento automatizado de identificación de bacterias (ver la Tabla de Materiales), incluyendo Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae y Aeromonas hydrophila (Tabla 1). Staphylococcus aureus (ver la Tabla de Materiales) se utilizó como control inmóvil negativo; Se utilizaron Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Salmonella typhimurium (ver la Tabla de Materiales) como cepas de control positivo.

1. Identificar cepas bacterianas de prueba que se utilizarán para el análisis de motilidad.
2. Incluya controles negativos inmóviles y cepas de control positivo móviles.

Observación de la motilidad bacteriana mejorada por TTC

1. Recoger colonias individuales de bacterias de prueba de placas de agar e inocularlas en el medio semisólido con TTC (cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio) perforándolas con agujas de inoculación.
2. Cultive los tubos a 37 °C en la incubadora durante 24-48 h para observar los resultados.
3. Observe el estado de crecimiento: caracterice las bacterias como inmóviles (-) si solo la línea de punción es roja. Caracterice las bacterias como móviles (+) si el color rojo se extiende ligeramente hacia afuera a lo largo de la línea de punción.

Tabla 1: Comparación de la motilidad bacteriana.

Colar		Medio semisólido con agar 0,4%		Medio semisólido con 0,4% de agar y 0,005% de TTC
		24 h	48 h	24 h	48 h
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
E. coli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
E. coli (15)		12	14	13	14
Salmonella spp. (8)		7	8	8	8
A. hydrophila (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
Los números indican el número de cepas positivas (+) y manchas negativas (-).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Bacto Agar	Difco
Escherichia coli	ATCC	ATCC25922	Control positivo
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	Control positivo
Staphylococcus aureus	ATCC	ATCC25923	Control negativo inmóvil
Triptosa	OXOIDE
TTC (cloruro de 2,3,5-trifenil-tetrazolio)	Sigma	298-96-4
Sistema automatizado de identificación microbiana VITEK 2	Bio Mérieux