Producción y recuperación de proteínas recombinantes a partir de vesículas derivadas de bacterias

Resumen

Fuente: Streather, B. R., et al. Producción y análisis optimizados de vesículas rellenas de proteínas recombinantes de E. coli. J. Vis. Exp. (2023)

Este video demuestra la producción y el aislamiento de proteínas recombinantes marcadas con péptido nucleante de vesículas (VNp) a partir de vesículas bacterianas. Un inductor desencadena la expresión de proteínas marcadas con VNp, impulsando la formación y encapsulación de vesículas, seguidas de centrifugación y sonicación para una recuperación eficiente de proteínas sin lisis celular

Protocolo

1. Cultivo celular bacteriano e inducción de proteínas

1. Para inducir la expresión de proteínas recombinantes del promotor T7, agregue isopropilo β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) a una concentración final de hasta 20 μg/ml (84 μM). La inducción de la expresión de proteínas recombinantes debe ocurrir en la fase logarítmica tardía (es decir, densidad óptica típica, OD₆₀₀ de 0.8-1.0) para la producción de vesículas. ​
   NOTA: La duración del período de inducción puede diferir entre las proteínas, ya que algunas alcanzan la producción máxima a las 4 h y otras durante la noche (18 h). Hasta la fecha, se ha obtenido la máxima exportación....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Isopropilo β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG)	Melford	367-93-1
Caldo de lisogenia (LB) / agar LB	Stock de laboratorio	NA	10 g/L de triptona; 10 g/L de NaCl; 5 g/L de extracto de levadura (1,5 g/L de agar)
MF-Millipore Filtro de membrana (0,1 μm, MCE)	Merck	VCWP04700
Filtro de membrana Millipore Express PLUS (0,45 μm, PES)	Merck	HPWP04700
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Stock de laboratorio	NA