Patrones microfluídicos y seguimiento basado en fluorescencia del crecimiento bacteriano unicelular

Abstract

Fuente: Pioli, R., et al., Patrón de microorganismos y micropartículas a través del ensamblaje secuencial asistido por capilaridad. J. Vis. Exp. (2021)

Este video demuestra el método de capturar células individuales de Escherichia coli (E. coli) marcadas con fluorescencia en trampas microfluídicas utilizando una suspensión libre de carbono y un flujo controlado, seguido de la adición de nutrientes para desencadenar el crecimiento y las imágenes de fluorescencia de las microcolonias.

Protocol

1. Patrones bacterianos

1. Un día antes del experimento, cultive una población de Escherichia coli (cepa MG1655 prpsM-GFP). Inocular el cultivo directamente del caldo congelado y cultivar durante la noche durante 20 h en medio de caldo de lisogenia (LB) en una incubadora agitadora a 37 °C. Añadir 50 μg/mL de kanamicina para que las células retengan el plásmido prpsM-GFP (proteína verde fluorescente).
2. El día del experimento, configure la incubadora de caja (Figura 1A) a 37 ° C varias horas antes del experimento para garantizar una temperatura uniforme y estable antes de comenzar. Luego, coloque la bomba de jeringa y la placa de vidri....

Results

Figura 1: Esquema de la plataforma para el ensamblaje secuencial asistido por capilaridad en un canal microfluídico. (A) Incubadora de cajas. La incubadora de cajas mantiene una temperatura uniforme y constante (aquí, 30 °C) dentro del canal.......

Materials